【摘 要】
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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种广泛应用于农业害虫生物防治的细菌。Bt在芽孢形成时会产生杀虫晶体蛋白(Insecticidal CrystalProteins，ICPs)，包括晶体毒
【出 处】
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浙江大学农业与生物技术学院 浙江大学
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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种广泛应用于农业害虫生物防治的细菌。Bt在芽孢形成时会产生杀虫晶体蛋白(Insecticidal CrystalProteins，ICPs)，包括晶体毒素(crystal toxin，Cry)和细胞裂解素(cytolytic toxin，Cyt)。Cry毒素是目前研究最深入、应用最广泛的Bt杀虫毒素。Bt在营养生长期间还会分泌另外一种杀虫蛋白，即营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidalproteins，Vip)。研究表明Vip蛋白与Cry毒素在氨基酸序列上没有同源性，并且杀虫机理也不同。本论文设计了一个由Cry毒素和Vip蛋白融合而成的抗虫基因cry1Ab-vip3DA，并利用农杆菌介导法转入水稻，获得了转基因抗虫水稻。
根据单子叶植物密码子偏好性改造DNA序列，并设计合成了一个融合基因cry1Ab-vip3DA。这个基因和玉米泛素启动子(ZmUbi-1)、玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)终止子连接形成抗虫基因表达框。这个表达框被克隆到以抗草甘膦基因G170为筛选标记的T-DNA水稻转化载体中，获得了抗虫抗草甘膦的水稻转化载体1300-Ubi-cry1Abvip3DA-G170。通过农杆菌介导法将这个T-DNA转入到水稻中。对获得的转基因水稻进行PCR鉴定，结果显示融合基因cry1Ab-vip3DA已成功转入水稻。提取转基因水稻叶片蛋白质进行Western Blot检测，结果显示抗虫融合基因和抗草甘瞵基因都成功地得到了表达。对转基因水稻进行生物测定，结果显示转Bt融合基因水稻对稻纵卷叶螟具有良好的抗性。本论文获得的转基因水稻可用于培育抗虫转基因水稻。
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