论文部分内容阅读
目的：研究丙酮酸激酶2(PKM2)在膀胱癌组织中的表达，应用RNA干扰方法下调PKM2基因表达，研究PKM2对膀胱癌细胞T24细胞增殖和侵袭迁移的影响，探讨其可能的机制。 方法：(1)组织水平上，免疫组织化学法检测50例膀胱癌及15例正常膀胱组织的PKM2蛋白表达;(2)细胞水平上，利用脂质体2000将PKM2-siRNA和对照siRNA分别转染膀胱癌细胞株T24，将未转染和转染无义siRNA的细胞分别作为空白组和阴性对照组，PKM2siRNA为实验组。采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中PKM2的mRNA和蛋白的表达量，MTT法检测细胞的增殖变化，Transwell法、划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力。Western blot法检测三组细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白PTEN、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2、MMP2、MMP9的表达。 结果：在组织水平上，PKM2蛋白在膀胱癌组织中的阳性表达率明显高于正常膀胱组织(P＜0.05)，且与病理分级和临床分期相关;在细胞水平上，Western blot结果显示实验组PKM2蛋白表达量显著降低，与阴性对照组和空白对照组相比差异有统计学意义(P=0.0077)。RT-PCR结果显示实验组中PKM2mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义，(P=0.000)。MTT实验结果显示，实验组细胞的增殖能力较阴性对照组和空白对照组明显减弱，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Transwell体外侵袭实验显示实验组、阴性对照组和空白对照组穿膜细胞数分别为76.80±3.19、168.00±3.16、176.40±2.40，实验组较其他两组侵袭能力显著降低，差异有统计学意义(F=176.04，P=0.000)。划痕实验结果显示，实验组、空白对照组，阴性对照组细胞平均迁移能力分别为31.58±3.13、81.04±2.37、82.50±2.97，实验组细胞迁移能力较其他两组明显下降(F=311.26，P=0.000)。PI3K/AKT信号通路中P-AKT、Bax、PTEN表达上调(P＜0.05)，Bcl-2、MMP2、MMP9表达下调(P＜0.05)。 结论：PKM2的过表达可能在膀胱癌的发生发展过程中发挥重要作用，下调PKM2基因表达能抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭、迁移，其机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。