爪哇根结线虫侵染后黄瓜差异表达基因的分离

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根结线虫(Meloidogyne spp.)是黄瓜上的一种重要病原物,抗病育种是防治植物线虫危害的一种理想方法。为加速国内抗根结线虫黄瓜品种的选育,本文对我国南方主要栽培的20个黄瓜品种进行了温室的抗感性鉴定,研究了根结线虫对黄瓜株高和根长的影响,在国内外首次利用mRNA差异显示技术进行黄瓜和爪哇根结线虫(M. javanica)在亲和性互作中基因表达变化的研究,主要取得如下成果: 1.采用抗性等级划分标准对20个南方主栽黄瓜品种进行了温室抗感性鉴定,其中神农四号是轻度感病品种;墨王子、早青二号、绿珍一号、新万吉为中度感病品种:其它15个品种是感病品种,即津青八号、粤秀二号、粤秀三号、粤秀一号、夏旺青瓜、新穗农、绿丽青瓜、绿美人、穗园、绿优一号、早青一号、夏青四号、早青一号、清味、优胜二号和穗园5号。 2.研究爪哇根结线虫对不同黄瓜品种株高和根系的影响,经多重比较分析表明,不同品种之间在株高和根长上多为差异显著,株高和根系相差较大,可能与品种和线虫侵染有关。 3.用mRNA差异显示技术分离爪哇根结线虫和黄瓜亲和性互作相关反应基因,经反向Northem检测,获得了五个差异表达的基因片段,分别为2C61、3G83、2A32、 2G21和2C41。通过同源序列比较:2C61和2A32可能为新序列;3G83和黄瓜的核糖体蛋白L5基因同源性100%,该蛋白在植物的生理和代谢中发挥作用;2C41和神经细胞粘附分子有31%的同源性,和索科的地丝虫NADH脱氢酶亚单位4L有36%的同源性,该蛋白可能在线虫寄生生活中起作用;2G21和水稻Oryza sativa的BAC克隆B1292H11有93%的同源性。同时运用蛋白质数据库预测了2G21片断蛋白的分子量为15405.4,分子式是C<,662>H<,1076>N<,192>O<,216>S<,7>,理论PI为7.92,负氨基酸残基(Asp+Glu)为10个,正氨基酸残基(Arg+Lys)为11个。 DDRT-PCR技术是一种简单方便的基因分离技术,本文成功地构建了黄瓜对爪哇根结线虫侵染反应相关基因的DDRT-PCR分离方法,研究结果为理解爪哇根结线虫和黄瓜的亲和性互作打下重要基础。
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