【摘 要】
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目的:观察双孔钾通道TREK-1过表达及脉络宁注射液对氧糖剥夺星型胶质细胞(astrocyte,Ast)存活率和谷氨酸(Glu)摄取能力的影响,探讨TREK-1在Glu兴奋性毒性中的调节作用。方法:
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目的:观察双孔钾通道TREK-1过表达及脉络宁注射液对氧糖剥夺星型胶质细胞(astrocyte,Ast)存活率和谷氨酸(Glu)摄取能力的影响,探讨TREK-1在Glu兴奋性毒性中的调节作用。方法:原代培养大鼠星形胶质细胞,运用DNA质粒转染法构建星形胶质细胞TREK-1过表达模型,采用细胞氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation,OGD)模型,模拟体内脑缺血环境,实验分为对照组、TREK-1过表达组、脉络宁注射液组,分别于氧糖剥夺2h、4h、6h、8h后,MTT法检测细胞增殖率;FITC/Propidium Iodide双染色法和Hoechast 33258染色法检测细胞凋亡;Glu检测试剂盒法检测细胞摄取率;RT-PCR法检测Glu特异性转运体GLT-1、嘌呤能受体P2X7、谷氨酰胺合酶(GS)、凋亡信号因子Caspase-3和TREK-1通道的表达变化。结果:1.运用大鼠TREK-1 DNA重组质粒转染星形胶质细胞,TREK-1过表达模型构建成功;2.在生理条件下,TREK-1过表达及脉络宁液对星形胶质细胞活性无明显影响,而在氧糖剥夺后,TREK-1过表达及脉络宁注射液均能降低其细胞凋亡率;3.氧糖剥夺星形胶质细胞的Glu摄取能力代偿性增强,TREK-1过表达、脉络宁注射液干预,二者均能增强均能增强其Glu摄取能力;4.TREK-1过表达及脉络宁注射液均可提高氧糖剥夺模型星形胶质细胞的GLT-1、GS、TREK-1 mRNA表达量,降低Caspase-3 mRNA表达量,对P2X7R表达无量影响。结论:1.运用TREK-1 DNA重组质粒可成功转染大鼠脑皮质星形胶质细胞;2.TREK-1过表达和脉络宁注射液可提高氧糖剥夺星形胶质细胞的细胞存活率,增强谷氨酸摄取能力,其增强作用与增加GLT-1和GS表达相关。
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