乙肝核酸疫苗小鼠体内生物分布及与生殖腺基因组整合可能性的初步研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuhaiyi123
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该实验采用<32>P-乙肝核酸疫苗(<32>P-HBV DNA),结合三氯乙酸(TCA)沉淀,全身放射自显影和DNA提取后凝胶电泳放射自显影法研究小鼠肌肉注射乙肝核酸疫苗后在机体内的生物分布情况;采用PCR方法研究小鼠肌肉注射非标记乙肝核酸疫苗后与生殖腺基因组的整合情况.结果表明:(1)质粒DNA疫苗除注射局部肌肉分布较多外,其他一些重要组织也有分布,其中腺体组织(肾上腺、胰腺、胸腺)中的浓度最高,其次为排泄物(膀胱、肠内粪),脑组织中浓度最低.表明<32>P-乙肝核酸疫苗不易进入血脑屏障.生殖器官在给药早期(10min)也有一定水平分布,但随时间延长迅速降低.(2)各组织酸可沉淀放射性按AUC从高到低排列依次为胸腺、肾上腺、膀胱、生殖腺、脂肪、肠内粪、胰腺、颌下腺、脾、小肠、眼球、肝、肠内容、肾、甲状腺、肺、淋巴结、对侧肌肉、心脏和脑.(3)组织中提取DNA经琼脂糖凝胶电泳,放射自显影显示,胫前肌肌注给药后10min、4hr和24hr肝脏、肌肉及血浆中可见标记乙肝核酸疫苗放射性条带,4d和7d未观察到放射性条带.(4)整体放射自显影结果显示:给药后10min,心肌、肝脏、肺和肾脏中的放射性浓度分布最高,且放射自显影灰度由高到低排列为肾脏>肝脏>肺>心肌,其它时间点未观察到器官或组织特异的高放射性强度区域性分布.(5)该研究PCR法扩增30个循环时,最低可清晰见到20拷贝的扩增产物,小鼠给非标记乙肝核酸疫苗2周后生殖腺DNA经提取、电泳、上样孔处条带胶回收物PCR扩增30个循环后,未见目的条带.
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