【摘 要】
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在pH7.0条件下利用膜分离组件处理腈水解酶粗品,并添加0.5%蔗糖作为冻干保护剂冻干,得到纯化的腈水解酶,其酶活为69U。结合葡聚糖凝胶层析和SDS-PAGE电泳可知纯化的腈水解酶
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在pH7.0条件下利用膜分离组件处理腈水解酶粗品,并添加0.5%蔗糖作为冻干保护剂冻干,得到纯化的腈水解酶,其酶活为69U。结合葡聚糖凝胶层析和SDS-PAGE电泳可知纯化的腈水解酶是分子量为21190Da的寡酶,该酶催化R,S-扁桃腈的最佳条件是:pH 9.6,酶与底物的质量比为7:10,温度40℃,实验发现甲苯-水组成的两相反应大大提高了酶的催化效率,且甲苯与水最佳体积比为1:10。添加选择性吸附R-扁桃酸的717树脂有利于转移生成的R-扁桃酸,导致转化率的提高。以D155树脂为基体,通过二环己基碳二亚胺与赖氨酸缩合,制备出L-D155树脂,再以L-D155树脂为载体,通过戊二醛分别与载体和腈水解酶形成席夫碱制备固定化腈水解酶。固定化酶红外分析表明D155树脂成功地通过酰胺键接枝了赖氨酸,N-L-D155在1671 cm-1处出现的宽峰也证明腈水解酶通过席夫碱反应被成功固定在L-D155上。腈水解酶的最佳固定化条件为:戊二醛、载体游离氨基与腈水解酶三者的摩尔比为:0.11:1:1.72×10-4,pH 5.25,该条件下制备的固定化腈水解酶活力为10 15U,Km值为23.11mmol/L,偶联率为43.2%,其热稳定性有所提高,且连续使用5次后可保持85%活力。
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