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本研究旨在通过利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术联合纳升液相色谱和串联质谱(NanoLC-MS/MS)技术,研究一对不同转移潜能的高低转移肺癌细胞系SPC-A-1sci和SPC-A-1的差异表达蛋白,以筛选出非小细胞肺癌(NSCLC)转移相关的标志物或治疗靶点。 第一部分:NSCLC转移相关差异膜蛋白的定量分析。共鉴定出差异表达蛋白59个,上调27个,下调32个。对获得的差异蛋白进行基因显著性(GO)分析。应用实时定量 PCR(qTR-PCR)和蛋白质印迹法(WB)验证差异膜蛋白,结果与质谱定量一致。 第二部分: NSCLC转移相关差异总蛋白的定量分析。共鉴定出蛋白5818个,定量蛋白5443个,标记率达到93%,上调131个,下调125个。对这些差异蛋白进行GO和Pathway分析,并对21个差异蛋白进行qTR-PCR和对10个差异蛋白进行WB验证,结果与质谱定量一致。结果提示MYH9,GSN,ANXA4和CPNE3是4个新的可能与NSCLC转移相关的蛋白。 第三部分:NSCLC转移相关蛋白CPNE3的功能及初步机理研究。通过si-RNA分析这4个候选蛋白的功能。结果提示MYH9和CPNE3可能促进细胞的迁移和侵袭。CPNE3的体内实验提示降低 CPNE3的表达能抑制非小细胞肺癌的转移率和结节的形成。免疫组化的实验结果也证明 CPNE3的表达与NSCLC病人的临床分期和TNM分期密切相关。本实验在体外和体内水平揭示CPNE3可能是NSCLC治疗的一个新的干预靶点或预后指标。