DNA损伤是在基因复制过程中导致的基因核苷酸序列的改变,同时导致遗传特征的变化。研究表明,许多肿瘤癌症的发生与基因损伤有着重要的联系。目前已经有一些对DNA损伤的检测和修复技术的研究,对分子诊断有着一定的辅助作用。COLD-PCR作为PCR的一种新模式,能够在不改变常规PCR反应所用试剂和仪器的情况下选择性的对损伤和突变的目的基因进行扩增,起到对目的基因特异性富集的作用。本研究通过对损伤基因的定点切除和修复,结合COLD-PCR的检测手段,建立一种对DNA损伤进行检测的新方法,长度为200 bp的DNA序列发生单碱基变化时其Tm值会产生0.5-2.0 ℃的变化。在对含有损伤的DNA寡核苷酸链进行检测的过程中,发现在碱基切除修复后进行COLD-PCR实时荧光定量扩增的结果中可以显示出该方法对于基因损伤检测的效果,并能实现对不同损伤基因个数的检测。通过优化反应条件,降低目标链中损伤基因相对于正常基因的比例,达到对损伤基因0.01%的检测丰度。并且降低修复酶的使用浓度,基于本实验的方法相对于报道过的其他方法体现出修复酶灵敏性的优势。将该方法应用于细胞中,发现能够实现对实际细胞样品中DNA损伤的检测,且能够对不同程度的损伤加以对比和区分。实验还发现不同的活性氧物种能够引起DNA的氧化损伤,可能作为导致癌细胞发生氧化损伤从而对癌症的治疗提供一个新的潜在途径。本文建立的将定点切除技术和COLD-PCR结合的方法实现了对基因损伤的检测,使用常见的检测设备、操作相对简单,并有较高的检测灵敏度,且实现了该检测方法在实际细胞样品中的应用,对于体内损伤细胞的检测和对癌症的早期诊断起到辅助作用。