本研究检测了添加细胞生长因子HGF引起细胞汇合后所产生的ES样细胞克隆之分化状态，据此构建了汇合依赖型体细胞重编程的理论模型。旨在探讨建立一种未经基因组修饰的多能干细胞诱导技术的可能性。1)实验中，比较了几种小鼠皮肤细胞培养方法，结果表明，选择出生后7-15天的小鼠，保证内侧基膜能够彻底去除的组织块贴壁培养法比较方便经济，适于实验室中小鼠皮肤细胞的培养。另外，在对细胞进行消化传代时，分步消化法要优于一次性消化法。再者，D-Hanks液比PBS缓冲系统能更好地维持pH的稳定和细胞滲透压，对细胞起到保护作用。2、一般小鼠皮肤组织块贴壁后6-8天，组织块周围基本都能迁移出细胞，细胞密度较大，此时可挑出组织块继续培养。第10天吋，改用添加生长因子HGF和E2的培养液；13-15天时达到细胞汇合，并出现部分细胞聚集现象；20天左右，培养的小鼠皮肤细胞出现ES—like细胞克隆。这仅仅是形态学的变化还是细胞发生了其他变化，我们对其进行了检测。检测前培养液中添加ES细胞分化抑制因子LIF继续培养。3)碱性磷酸酶是细胞保持未分化状态的一个重要指标，因此本文验首先对ES样细胞克隆进行了碱性磷酸酶检测，结果呈阳性，表明细胞可能发生了由体细胞剑未分化的多能状态的重编程。4)Oct4足多能性细胞特异表达的一种多能性标志基因，在未分化的纠胞中有表达，细胞分化时表达抑制，因此山足鉴定细胞是否处于未分化状态的重要指标。本实验叶，继确定ES样细胞丸隆碱性磷酸酶检测呈阳性后，又采川免疫细胞化学的方法，对其进行了Oct4检测。结果表明，这些细胞克隆阳性表达Oct4，这边一步证实了这些纠胞发生了分化逆转。5)基于上述研究结果，本文进一步对细胞汇合及HGF的信号效应进行了理论研究，发现纠胞会汇与HGF的协同效应与全能性细胞主导基因的表达调控存在内在联系。纠胞汇合与HGF的刺激的刺激可能协同激活了β-catenin与Stat3信号，而β-catenin与Stat3信号．正是全能性细胞主导基因表达的关键调控分子。本文据此建立了汇合依赖型体细胞重编程模型。6)研究对该模型的实践可行性进行了初步验证。SSEA是特异胚胎干细胞表面抗原，Sox2和Nanog(?)对于维持细胞的自我更新和多能性也起到重要作用。因此我们初步检测了这三个重要因子,结果显示,它们均在集落中表达阳性。本文在一定的实验结果和理论分析前提下,构建了一个体细胞重编程的新方法。其实践可行性还需要进一步做全面调查。如果可行,该方法将无需基因组修饰而生产iPS细胞,这有可能为再生医学和iPS细胞的临床应用带来很大的帮助。因此,关于这个方向的深入调查有实际的应用价值和重大的科学意义。