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研究背景：急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一种临床特征及分子生物学特征都具有异质性的疾病。多种基因异常对AML的发病及预后具有重要影响。IDH1基因编码胞浆内依赖NADPH+的异柠檬酸脱氢酶,其132位精氨酸密码子(R132)单核苷酸突变是神经胶质细胞瘤中十分常见的获得性体细胞突变。新近发现,IDH1R132密码子突变是成人急性髓系白血病中的重现性基因异常,突变率约为5.5%-8.5%,在CN-AML中突变率为8.4%-16%。但是IDH1突变AML的临床及生物学特征尚不明确。研究目的：检测IDH1基因R132密码子在成人急性髓系白血病患者中的突变,并描述IDH1突变AML的临床和生物学特征及对AML预后的影响。研究方法：收集410例初治成人AML患者骨髓标本。所有病例均来自2004年10月-2010年3月中国医学科学院血液病医院门诊和住院收治患者。采集患者骨髓,提取单个核细胞,提取基因组DNA。合成错配引物构造合适的限制性内切酶识别位点,以患者基因组DNA为模板,PCR反应扩增跨越IDH1第132位密码子的片段,对PCR产物进行酶切,根据酶切所得片段大小的差异,筛选出可能发生突变的标本。再将其克降入载体进行测序以鉴定突变。FLT3-ITD的检测采用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物片段大小的方法。收集病例信息。运用SPSS13.0软件进行统计分析。结果：410例患者中,发现24例IDH1R132密码子突变,突变率为5.85%。突变有4种类型,以R132H和R132G为主。在以往的研究中,所有IDH1突变都是杂合子,而在我们的研究中,发现一例纯合子突变体。IDH1突变患者与IDH1野生型患者相比,其FAB分型、核型,治疗前的外周血细胞计数、骨髓白血病细胞比例、免疫表型及首次诱导完全缓解率都无具统计学意义的差异。与以往的报道不同的是,我们发现IDH1R132突变可发生于M2b和M3这两种带有特征性染色体易位和融合基因的AML亚型,而且在M2b中的突变率达到12%。此外,IDH1突变患者的FLT3-ITD阳性率与野生型患者相比略高,虽无统计学差异,却不同于以往报道中突变型患者的FLT3-ITD阳性率显著低于野生型患者。因此,在本次研究中IDH1突变AML没有表现出独特的临床及生物学特征。研究背景：急性髓系白血病患者中约有12%携带有t(8；21)染色体易位,表达AML1-ETO融合蛋白。AML1是造血细胞分化成熟所必需的转录因子,AML1的多种靶基因在造血细胞的分化成熟中具有重要作用,其功能异常会导致白血病的发生。AML1-ETO融合蛋白的ETO部分抑制了AML1对靶基因的转录调控,进而阻断了造血细胞的分化。此外,AML1-ETO融合蛋白还可以通过蛋白-蛋白之间的相互作用影响其他因子的靶基因的功能,从而干扰正常造血细胞的增殖与分化,促使白血病的发生。Spl是一种在多种组织中广泛表达的转录因子,在细胞增殖、凋亡及造血细胞分化中起着重要的作用。业已发现AML1-ETO可凭借其RUNT结构域与Spl结合,并抑制Sp1的转录激活功能。研究目的：使Spl在表达AML1-ETO融合蛋白的白血病细胞系中过量表达,解除AML1-ETO对Spl的抑制作用,观察细胞凋亡及分化状态的改变,以揭示AML1-ETO对Spl功能的抑制对造血细胞产生了何种影响,探讨AML1-ETO促成白血病发生的机制。研究方法：构建重组慢病毒表达载体pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-Sp1,在293T细胞中包装病毒,将Spl经感染导入表达AML1-ETO融合蛋白的Kasumi-1细胞系,使细胞瞬时过量表达Spl。荧光显微镜下观察细胞,如果带有绿色荧光则表明感染成功,进而在特定时间点经流式细胞术检测细胞凋亡及分化标志。结果：应用pCDH慢病毒系统成功构建并包装出pCDH-Sp1慢病毒,体外感染白血病细胞系Kasumi-1,Kasumi-1细胞出现明显的凋亡和分化趋势。