神经生长因子NGF在绿壳蛋鸡卵泡和输卵管中的表达及对卵泡发育的调控

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鸟类的排卵过程为卵巢发育成熟并产生成熟的卵泡,卵泡脱离卵巢通过输卵管的各个部分形成完整的蛋,并最终排出。而在这个过程中卵巢和输卵管受到诸多的生长因子和激素的调控。通过选育培养出的蛋鸡在进入高产期后几乎每天产蛋,其原因在于蛋鸡卵泡在生殖阶段可持续发育、并排卵和受精,卵巢排卵后亦不形成黄体,生殖周期极短,是作为生殖系统研究的理想试验动物。本试验以中国地方特色蛋鸡品种绿壳蛋鸡为试验材料,测定不同产蛋时期的等级前卵泡、优势等级卵泡和输卵管中的神经生长因子NGF及其受体的mRNA表达量,并对产蛋期和就巢期的组织进行NGF及其受体的表达对比,同时通过体外培养的方式对绿壳蛋鸡的F1卵泡颗粒细胞培养并添加NGF蛋白,测定各个受体的mRNA表达量和性腺激素的分泌量。结果如下:通过对绿壳蛋鸡不同产蛋阶段(19W、33W、50W、64W)的生殖组织进行采样并提取mRNA,并进行荧光定量对其卵泡和输卵管的NGF及其受体的mRNA表达量测定。结果表明:NGF在绿壳蛋鸡各个产蛋时期中的卵泡和输卵管中都有表达;在等级前卵泡中,除了产蛋末期外,其他时期的小白卵泡SWF的NGF和其高亲和力受体酪氨酸激酶A (TrkA)的mRNA表达量要显著高于其他等级前卵泡(P<0.05),且随着等级前卵泡的发育,NGF的表达量呈现下降的趋势,而在整个产蛋时期中,NGF在产蛋高峰期表达量最高;在等级卵泡中,NGF及其受体在F4卵泡中表达量在各时期都较高,且在产蛋前期和高峰期,F1-F4的mRNA表达量都高于F5的mRNA表达量,而在整个产蛋周期中,NGF的表达量在产蛋高峰期处于峰值;每个时期的输卵管各部位都有NGF的表达,且表达量随着绿壳蛋鸡产蛋周期的变化而变化,在产蛋后期NGF及其高亲和力受体表达量最高。以上结果说明,NGF的表达量与蛋鸡的生殖状况和产蛋性能相关,推测NGF可能参与了调控卵巢和输卵管生长发育并有助于蛋鸡产蛋。利用荧光定量测定方法对绿壳蛋鸡产蛋期和就巢期各组织的NGF及其受体的表达进行研究。结果表明:产蛋期的卵巢大于就巢期卵巢,且具有小黄卵泡SYF和F1-F6卵泡,而就巢期卵巢处于萎缩形态,没有优势卵泡;在产蛋期的卵巢基质中,NGF及其受体显著高于就巢期(P<0.05);在等级前卵泡中,SWF和LWF中的NGF及其高亲和力受体在产蛋期的mRNA的表达量显著高于就巢期(P<0.05)。以上结果说明NGF及其受体在卵巢组织中的表达与禽类产蛋周期有影响,并可能参与了禽类产蛋时期与就巢时期的调控,NGF的表达有助于激活非发情期卵巢并改变卵巢形态,促使等级前卵泡发育成为等级优势卵泡。通过对F1卵泡颗粒细胞离体培养,添加NGF蛋白并进行受体基因的荧光定量及激素的Elisa检查,探究NGF蛋白在蛋鸡卵泡发育过程中的作用。结果表明:在添加不同浓度NGF蛋白处理后,颗粒细胞中的p75受体的表达量显著升高(P<0.05),且随着NGF蛋白的浓度升高而升高;处理不同浓度的NGF蛋白后,颗粒细胞中的FSHR和LHR也显著升高(P<0.05),且存在正相关关系;通过Elisa检查发现,添加NGF蛋白处理后的颗粒细胞中雌激素的分泌显著升高(P<0.05),而孕激素则相反;在依次添加NGF和FSH处理后发现,雌激素的分泌在单独添加NGF和FSH时都将显著升高(P<0.05),而且同时添加有叠加效果,而孕激素的分泌则相反。以上结果表明,NGF在禽类卵泡中能促进其LHR和FSHR的表达,通过加强细胞对激素的敏感性来调控卵泡的发育和排卵,并且影响动物的生理周期。综上所述,NGF及其受体能促进禽类早期卵巢和输卵管的生长和发育,并在卵巢和输卵管成熟后,促进卵巢卵泡的发育以及排卵,同时在也影响鸡的生殖周期。
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