论文部分内容阅读
目的:探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型5(serine protease inhibitor Kazal 5,SPINK5)编码的淋巴上皮Kazal型相关抑制剂(lymphoepithelial Kazal type related inhibitor,LEKTI)是否在2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠皮肤屏障中具有保护作用。研究方法:构建小鼠SPINK5基因重组腺病毒载体。使用DNCB诱导BALB/c小鼠AD模型。向AD小鼠背部皮损内注射SPINK5基因重组腺病毒载体。同时设置空白对照及局部外用地塞米松对照组。评估AD小鼠皮肤损害、瘙痒评分、皮炎评分。光镜下观察不同处理组小鼠病理改变。免疫蛋白印迹(Western Blot,WB)法检测各组皮损局部LEKTI的表达水平。实时定量PCR(Real Time PCR,RT-PCR)检测各组皮损局部LEKTI和皮肤屏障相关蛋白丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)及其代谢相关蛋白酶:角质层胰蛋白酶(stratum corneum tryptic enzyme/kallikrein 5,SCTE/KLK5),角质层糜蛋白酶(stratum corneum chymotryptic enzyme/kallikrein 7,SCCE/KLK7),通道活化丝氨酸蛋白酶1(channel-activating serine protease1,CAP1),半胱胺酸天冬氨酸特异性蛋白酶14(cysteine aspastic acid-specific protease 14,CASP14)编码基因的mRNA的表达水平。结果:SPINK5基因重组腺病毒载体治疗组与模型空白对照组的小鼠相比皮损状况、瘙痒次数、皮炎评分、表皮厚度、嗜酸性粒细胞及肥大细胞浸润显著改善,SPINK5和FLG的mRNA表达水平增加,KLK5、KLK7、CAP1及CASP14的mRNA表达水平降低(P<0.01)。SPINK5基因重组腺病毒载体治疗17天组较治疗10天组在小鼠的搔抓次数,表皮厚度,嗜酸性粒细胞浸润,LEKTI表达水平及SPINK5、FLG、KLK7的mRNA表达水平改善效果更明显,差异具有统计学意义(P<0.01)。SPINK5基因重组腺病毒载体治疗17天组与地塞米松组比较在改善小鼠的抓挠次数、表皮厚度、嗜酸性粒细胞浸润方面没有差异(P>0.05)。SPINK5基因重组腺病毒治疗组和地塞米松组比较在改善小鼠的皮损状况及皮炎评分,肥大细胞浸润,CASP14、KLK5、CAP1的mRNA表达水平没有统计学差异(P>0.05)。结论:SPINK5编码的LEKTI蛋白对DNCB诱导的AD小鼠具有明显治疗效应,其机制与调节FLG代谢相关酶类的表达有关,从而修复损伤的皮肤屏障。