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本论文主要研究高纯度猪血红蛋白的提取与分离纯化工艺及其戊二醛聚合猪血红蛋白的纯化工艺。通过比较DEAE-Sepharose Fast Flow、SOURCE 30Q和Q Sepharose XL等三种常用的阴离子交换剂层析介质对猪血红蛋白的分离纯化效果,选择DEAESepharose Fast Flow介质作为猪血红蛋白的分离纯化介质。在此基础上,实验设计了两种工艺路线,工艺路线A:首先用低渗法提取猪血红蛋白,然后用超滤、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶排阻层析三步法分离猪血红蛋白;工艺路线B:首先用热敏法提取猪血红蛋白,然后用超滤和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析两步法分离纯化猪血红蛋白。通过比较两种工艺路线,选择工艺路线B来分离纯化猪血红蛋白。色谱条件为,洗脱液A:20 mmol/L PB(pH7.2)+30 mmol/L NaCl,洗脱液B:20 mmol/L PB(pH 7.2)+1.0 mol/L NaCl,洗脱程序:用缓冲A液平衡,上样,缓冲A液洗脱,待样品完全流穿,再用缓冲B液洗脱;洗脱流速为:2.5 cm/min,检测波长为280 nm。此方法所纯化的猪血红蛋白经测定浓度为:7.46 g/dL,回收率为:90.3%,以高效凝胶排阻色谱、高效离子交换色谱及SDS-PAGE电泳检测纯度均在99.9%以上。此工艺具有分离速度快,收率高、操作简单,可线性放大的特点。纯化所得的高纯度猪血红蛋白,按照本实验室已申请的专利方法制备成戊二醛聚合猪血红蛋白后,通过凝胶过滤柱联用多角度激光散射检测其分子量分布范围约为65 kD～800 kD。我们用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱对其进行分离纯化,色谱条件为:洗脱流速为:1.3 cm/min,缓冲液A:20 mmol/L PB(pH7.2,),缓冲液B:20 mmol/L PB(pH 7.2)+1.0 mol/LNaCl,洗脱程序为:0～30min,5%缓冲液B;30～80 min,5～50%缓冲液B;80～100 min,100%缓冲液B。纯化后的戊二醛聚合猪血红蛋白的平均分子量在300 kD左右,四聚体血红蛋白含量小于5%,达到工艺要求。