HPLC法测定禽血清和肌肉中恩诺沙星含量的方法改进与应用

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随着畜牧业、养殖业的快速发展,部分养殖企业为防止动物疾病的发生并追求畜禽的快速生产,长时期使用抗菌药与添加剂已成为普遍现象,其中部分兽药也用于人类或两者结构相似,若兽药超剂量残留于动物源性食品中可能会对人类健康构成一定威胁。氟喹诺酮类药物(FLuoroquino Lones,FQs)是新一代高效、广谱抗菌药,广泛应用于畜禽和水产养殖业。恩诺沙星(EnrofLoxacin,ENR)是世界上第一个动物专用的氟喹诺酮类药物,具有抗菌谱广、杀菌活性强、体内分布广泛等特点,对预防和治疗动物细菌性疾病和支原体感染方面有较高疗效,尤其是在防治肉鸡沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、巴氏杆菌和支原体等疾病上更为常用。持续低剂量使用会造成药物原型及其代谢产物蓄积于食用组织,通过食物链进入人体,轻者可以引起一些机体的过敏反应,并且延迟和破坏正常菌群的生长,重者可导致食物中毒。此外,不同研究显示长期低剂量使用兽药可以导致细菌耐药性。测定血清中恩诺沙星含量是评价鸡场用药情况的第一手材料,通过HPLC检测血清中恩诺沙星的含量可以判断养殖场是否遵守休药期的规定,对比血清与肌肉中恩诺沙星含量可以分析肉中恩诺沙星的残留与血液中恩诺沙星代谢的相关性。本研究通过优化改进HPLC法,检测禽类血清和组织中恩诺沙星残留含量,分析药物在禽类体内的消除规律,通过对比研究可以把动物药代动力学与畜产品药物残留有效地结合起来,对研究休药期和控制畜产品药物残留有十分重要的意义。色谱条件:色谱柱(ODS-C18,4.6mm×150mm,5μm);流动相:0.5mol/L磷酸/三乙胺溶液-乙腈(81:19,v/v);柱温:室温25℃;检测器:紫外检测器2487;激发波长280nm,发射波长:450nm;流速:1.0mL/min;进样量:20μL结果表明恩诺沙星标准曲线在0.005-0.5μg/mL浓度范围内显著相关。在0.025、0.05、0.1μg/g三个添加浓度下肉鸡血清与肌肉空白样品的回收率分别为80.4-92.3%和79.2-92.3%;蛋鸡血清与肌肉空白样品的回收率分别为79.2-90.6%和78.4-90.0%;樱桃谷鸭血清与肌肉空白样品的回收率分别为82.4%-94.9%和80.4%-92.8%,变异系数均小于5%。该方法检测条件稳定,加标回收率高,变异系数较小,可操作性强,应用简单方便,能使血清和肌肉中的药物分离良好,没有杂峰,最低检测限小于10μg/kg,回收率均大于70%,RSD在14%以内,符合组织样品处理的真实度和精密度。HPLC检测方法可以用于禽类血清和肌肉中恩诺沙星的药物检测。
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