本研究利用苯酚—氯仿—异戊醇—核糖核酸酶法，从3个品种豇豆幼嫩叶子中分离出总基因组DNA，参照已知的几种Bowman—Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列和ATG起始位点，设计合成了两段长度为27bp且5端含有BamHI位点的寡核苷酸引物。以总DNA为模板，进行PCR扩增，得到长度约为340bp的均一特异性扩增产物CPTI DNA片段。 将该片段克隆到质粒载体pGEM—3zf（+）的BamHI位点上并转化大肠杆菌DH5α。监白筛选挑取白色菌落，快速少量提取重组质粒，用限制性内切酶BamHI和EcoRI、PstI作定向酶切。酶切图谱表明，来自白色菌落的大多数重组质粒含有340bp的插入片段，且克隆到的该片段以正向插入质粒载体。重组质粒pGMCL：：含有编码完整80个氨基酸的豇豆胰蛋白酶抑制剂结构基因和一段编码27个氨基酸的前导序列。前导序列中有3个ATG密码子。这一结果与Hilder等所报道的从即将成熟的豇豆子叶中分离出总RNA，经逆转录合成cDNA第一链，并以之为模板进行PCR扩增得到的CPTI的cDNA片段的碱基序列是完全一致的，但与Hilder所报道的CPTI cDNA往前导序列中有一个碱基差异，即前导序列中倒数第五个三联体密码子为CTG而不是TTG，但两者编码的都是亮氨酸。同源性分别达到100％和99.8％。这一结果说明了从总基因组DNA—PCR和从总RNA—cDNA—PCR所得到的CPTI片段的核酸序列是一样的。 利用限制性内切酶Smal和NcoI对重组质粒pGMCL27的前导序列进行缺失，切下含有编码7aa前导序列及80aa成熟蛋白的CPTI DNA，只保留成熟蛋白结构基因上游第一个ATG密码子。Klenow酶补平，T4DNA Ligase连接，将Sacl和Xbal双酶切得到的K约280bp的片段克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中，成功的构建了植物表达载体——pCACL，，为CPTI能在重要作物中进行基因表达和发挥抗虫性打下基础。 此外，还讨论了抗虫转基因植物的应用价值、前景和展望。