同电荷介质促进EGFP包含体复性的研究

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蛋白质复性是基因工程产品生产过程重要的环节。针对蛋白质复性过程中的聚集问题,本文利用本课题组开发的同种电荷介质辅助蛋白质复性的方法,开展同电荷介质辅助绿色荧光蛋白(EGFP)包含体的复性的研究。  利用分散聚合反应制备单分散聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(pGMA)微球(2.4μm),然后对微球表面的环氧基开环,接枝聚合GM A触须式长链,增加p GMA微球表面的环氧基的密度,通过控制接枝聚合反应,制备不同接枝量的微球,然后对微球表面修饰带负电荷的磺酸基,得到的最高的(pGMA-[GMA-SO3-]n3)介质的离子交换容量达到793μmol/g,约是未进行接枝聚合直接修饰磺酸基得到的(pGMA-SO3-)介质的2.8倍。  利用本实验室冻存的含重组质粒 pET28 a-EGFP的大肠杆菌表达 EGFP包含体,用不同电荷密度的带负电的微球用于促进EGFP包含体复性,结果表明,复性收率及复性速率均随着电荷密度的增大而提高,且同电荷介质抑制蛋白质聚集的作用与尿素具有一定的协同作用。另外,同电荷介质对于包含体蛋白具有一定的纯化作用,能吸附52.8%的杂蛋白,且介质的促进作用还具有一定的重复利用性。
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