大豆脂肪氧化酶,是一种氧化还原酶,在植物营养生长、防御反应、抗逆性、制备风味物质以及其他食品加工等方面有重要作用。但不同的品种、年份和种植地点对大豆脂肪氧化酶的活性会产生较大影响,严重制约了其开发与利用。因此,有必要通过分子生物学的技术对脂肪氧化酶进行研究,建立原核表达体系,得到纯度高的大豆脂肪氧化酶,为其作为食品中的添加原料、工厂化的开发和利用奠定理论基础。本试验通过对大豆栽培品种筛选得到脂肪氧化酶LOX-3活性较高的品种“黑农66”。利用基因工程技术手段对大豆品种“黑农66”中的LOX-3基因进行同源克隆,构建原核表达载体pET32b(+)-LOX-3;将构建的原核表达载体pET32b(+)-LOX-3转入蛋白质感受态Rosetta菌液中培养,用IPTG对Rosetta菌液诱导表达,纯化试剂盒纯化目的蛋白质;用BCA法对大豆脂肪氧化酶浓度测定,用分光光度法分别测量大豆脂肪氧化酶活性和大豆脂肪氧化酶对β-胡萝卜素的漂白性,通过β-胡萝卜素的吸光值和颜色的变化探究其漂白效果。本研究主要结果如下:(1)同源克隆技术手段得到LOX-3基因,LOX-3基因测序结果与NCBI所给基因序列比对相似度为99.95%,编码氨基酸序列比对结果相似度为100%,确定所得基因为大豆脂肪氧化酶LOX-3基因。(2)成功将LOX-3基因构建到原核表达载体pET32b(+)上,用IPTG将含有pET32b(+)-LOX-3原核表达载体的Rosetta菌液进行诱导表达,纯化大豆脂肪氧化酶LOX-3蛋白质测得其浓度为0.612354μg/μL、酶活为4267.4U,证明原核表达所得的大豆脂肪氧化酶蛋白具有活性。(3)通过大豆脂肪氧化酶LOX-3对β-胡萝卜素漂白时吸光值的变化和β-胡萝卜素颜色的变化,证明大豆脂肪氧化酶同工酶LOX-3具有漂白性。