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目的:建立体外细胞低氧模型;研究低氧对小鼠耳缘成纤维细胞中组蛋白H3-K9乙酰化的影响;研究低氧条件下小鼠耳缘成纤维细胞中HIF-1α的表达,探讨HIF-1α对低氧条件下耳缘成纤维细胞重编程的影响。
方法:采用冷胰酶消化法原代培养昆明小鼠耳缘成纤维细胞,传至第3~5代,血清饥饿培养24h后,将细胞分别进行常氧培养(对照组)和低氧培养(2%O2+98%N2)0.5h、1h、2h、3h和6h(实验组),免疫荧光细胞化学方法检测小鼠耳缘成纤维细胞组蛋白H3-K9乙酰化和HIF-1α的表达。
结果:1、冷胰酶消化法原代培养昆明小鼠耳缘成纤维细胞,细胞数量多,可稳定传代,在低氧培养后,形态学发生改变,并随着低氧培养时间的延长而生存率下降。2、低氧条件下小鼠耳缘成纤维细胞中可见组蛋白H3-K9乙酰化的表达,并且与低氧培养时间相关,呈时间依赖性。低氧培养0.5h,大部分成纤维细胞呈弱阳性表达,随着低氧培养时间的延长,阳性细胞数量增多,荧光强度增强,IOD值呈递增趋势,常氧对照组与低氧实验组之间差异显著(P<0.05)。3、低氧条件下小鼠耳缘成纤维细胞中可见HIF-1α的表达,也与低氧培养时间相关,呈时间依赖性。常氧培养下HIF-1α几乎不表达,低氧培养0.5h,有成纤维细胞呈弱阳性表达,随着低氧培养时间的延长,HIF-1α阳性细胞数量增多,荧光强度增强,IOD值呈现递增趋势,在低氧培养3小时,IOD值达到高峰,常氧对照组与低氧实验组之间差异显著(P<0.05)。经过线性回归统计分析,低氧培养条件下耳缘成纤维细胞中HIF-1α与乙酰化组蛋白H3-K9的表达具有相关性,有统计学意义(r=0.972,P<0.05)。
结论:在低氧条件下,昆明小鼠耳缘成纤维细胞组蛋白H3-K9乙酰化和HIF-1α的表达呈正相关,提示HIF-1α对低氧条件下耳缘成纤维细胞重编程起促进作用。