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乳腺癌是异质性强的肿瘤,其不同的分子特征决定了多样的生物学行为。乳腺癌临床一个具有挑战性的问题是如何准确地判断每一位患者的预后,从而对其实施个体化的治疗。随着分子生物学逐渐深入地应用到乳腺癌研究领域的各个方面,乳腺癌的治疗模式也从以临床试验为依据的循证医学模式向更为完善的个体化医学模式转化。但是目前乳腺癌临床治疗过程中,多通过临床病理特征制定辅助治疗方案,如肿瘤大小、腋窝淋巴结情况、肿瘤分级等等,但达到的效果并不理想。一些研究中心将多个临床病理特征结合起来综合评价预后,如诺丁汉预后指数(Nottingham Prognostic Index, NPI),以及Adjuvant!评价系统等,实践证明,这能够在一定程度上评价预后,但临床使用过程中发现仍有较大的缺陷。近年来一些大样本、高通量的基因表达谱研究,如70基因(Mammaprint)和21基因(Oncotype DX)显示出了比预后指数更强的预后预测能力。但值得一提的是,由于众多mRNA表达谱芯片研究多基于特定的人群,不同学者研究的基因表达谱中包含的基因各不相同,特别是mRNA表达谱只反映了转录水平,而实现其功能还需包括复杂的转录后调控和翻译过程。尤其是近年来microRNA对转录后调控作用的日益显现,使得更多在转录后和翻译过程的重要信息需要进一步进行多角度的研究探讨。了解乳腺癌预后的相关因素,还需要对现有的数据进行更深入的分析。本研究从对我单位5023例患者的乳腺癌数据库进行回顾性分析出发,运用生存分析等统计分析手段,筛选与乳腺癌预后相关的生物学标记;然后对筛选阳性的生物学标记与乳腺癌预后意义的相关性进行Meta分析,综合荟萃国内外文献的结果,通过系统回顾检验结论的可信度;然后,通过文献调研筛选出与该生物学标记相关的microRNA,检测其在石蜡包埋组织中的表达,探讨其在乳腺癌的预后价值。第一章,通过对本单位乳腺癌数据库的分析,筛选与乳腺癌相关的生物学指标。在本单位1980年1月至2009年12月间收治的5023例乳腺癌患者中,选择满足下列标准的患者进行回顾性研究:(1)病理科常规检测ER、Her-2、P53、Bcl-2、nm-23、PGP、PR 7个生物学指标;(2)病理类型为浸润性癌,淋巴结检测数目需≥6个;(3)术前未行新辅助治疗;(4)有详细的随访地址和临床资料的患者,共有144例患者满足这些条件。采用Kaplan Meier法进行估计,采用Log rank检验进行单因素分析,采用Cox回归模型进行多因素分析。通过这些分析评价乳腺癌组织中相关蛋白的表达与患者预后的相关性。经单因素分析发现影响乳腺癌无病生存期(Disease-free survival,DFS)的因素有肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、辅助放疗、辅助内分泌治疗、ER、PR、Her-2、Bcl-2。但采用Cox回归模型评价肿瘤大小、临床TNM分期、腋窝淋巴结转移、辅助化疗、辅助放疗、辅助内分泌治疗、ER、Her-2、P53、Bcl-2、nm-23、PGP、PR等13个可能影响预后的因素,得到临床TNM分期、腋窝淋巴结转移、辅助放疗、辅助内分泌治疗、Bcl-2是影响乳腺癌无病生存期的因素,其中Bcl-2是本组144例患者中唯一一个独立对无病生存期有影响的生物学标记。该结果提示,Bcl-2是乳腺癌无病生存期的独立预后因素。第二章,通过对已发表文献Meta分析,验证第一部分筛选出来的有预后意义的生物学标记。截至目前关于生物学标记与乳腺癌预后关系的文献很多,这些文献大多是回顾性的、分散的研究。目前国内外越来越多地采用证据分级来衡量某预后指标的价值。Meta分析可通过统计学方法对收集的多个研究资料进行分析和概括,通过增大样本含量来增加结论的可信度。在这一部分研究中,收集了1994年-2009年研究Bcl-2蛋白的表达和乳腺癌患者预后关系的文献,对样本量大于100,以DFS和OS作为终点研究Bcl-2蛋白与乳腺癌关系,同时报告了危险比(Hazard ratio,HR)的研究结果的研究进行系统评价。使用Comprehensive meta analysis软件分析Bcl-2蛋白对乳腺癌患者DFS和OS的影响。用同质性检验对不同原始研究之间结果的异质性进行检验,选择固定效应模型和随机效应模型进行Meta分析。根据筛选标准,筛选了9个研究用于评价DFS,DFS随机效应模型中HR为1.814(95%CI 1.373-2.396);筛选了10个报告用于评价OS,OS随机效应模型中HR为1.592(95%CI 1.190-2.130)。提示Bcl-2是一个乳腺癌的独立预后指标。第三章,通过实验评价生物学标记相关的microRNA与乳腺癌预后的相关性。microRNA(miRNA)是近年来发现的一类广泛存在于动植物体内的非编码小RNA。目前已被证实microRNA可以广泛参与多种生理病理过程,包括肿瘤的发生和发展。多个研究证实了调节Bcl-2的microRNA有miR-16、miR-15b、miR-15a,因其具有相似的序列结构、并发现多个共同的靶基因和通路,故一些学者将其共称为miR-16家族。第一、二部分的研究结果表明,Bcl-2是乳腺癌独立的预后因素。由此设想,调控Bcl-2的microRNA可能在乳腺癌的临床预后方面具有参考价值。根据文献报道,选取了3个miR-16家族的microRNA,初步探讨其在临床样本中的表达情况及其与临床特征和转归的关系。收集了我单位就诊的、浸润性癌,淋巴结检测数目≥6个、手术后至今已满5年且未复发转移者,或者术后尚未满5年,但已证实复发转移的患者的原发灶的蜡块或白片。提取小RNA,采用Taqman探针法检测乳腺癌组织中的miR-16、miR-15b和miR-195的相对表达量,探讨其与乳腺癌患者无病生存期的相关性。结果显示,肿瘤大小、ER、Her-2、Bcl-2与患者的预后相关,miR-16与DFS不相关,miR-195、miR-15b高表达的患者无病生存期短,但与低表达组相比,二者没有统计学意义。该结果提示miR-195、miR-15b可能与乳腺癌预后差相关,但需要扩大样本量、设计前瞻性的试验研究证实。