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目的: 1.体外培养人肾小球系膜细胞系(human renal mesangial cells,HRMC). 2.观察持续高糖和波动性高糖培养对HRMC细胞生长的影响,观察其细胞增殖率、凋亡率的变化. 3.探究CHOP信号通路在HRMC发生凋亡过程中的作用机制和GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽在减轻持续高糖和波动性高糖诱导的细胞凋亡过程中所起的作用. 4.证实GLP-1受体激动剂艾塞那肽对HRMC具有保护作用,探讨其可能的机制,为GLP-1受体激动剂对糖尿病肾病所起的保护作用提供理论依据,使其更好的应用于临床. 方法: 1.体外培养人肾小球系膜细胞细胞系,倒置显微镜下观察细胞形态学变化. 2.将培养的HRMC随机分为6组:N组:正常糖浓度(5.6mmol/L)培养基培养组、H组:高糖浓度(30mmol/L)培养基培养组、F组:波动血糖培养组(先用高糖浓度培养基培养3h,再用正常糖浓度培养基培养2h,一天中重复3次,然后低糖培养基过夜)、N+G组:在正常糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、H+G组:在高糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、F+G组:在波动糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽.6组分别干预24h.倒置显微镜观察6组细胞形态学变化,并拍照记录;MTT法测定6组细胞的增殖率;流式细胞仪测定6组细胞的凋亡率;Western blot法测定各组细胞CHOP蛋白的相对表达量;RT-PCR法测定各组细胞CHOP mRNA的相对表达量. 结果: 1.人肾小球系膜细胞体外传代培养生长状态良好. 2.倒置显微镜观察细胞形态,结果显示波动性高糖培养细胞24h后细胞形态发生明显变化,细胞变短,细胞边界不清,数量明显减少. 3.MTT法测定细胞增殖率,结果表明H组细胞增殖率大于N组,差异有统计学意义(p＜0.05);F组细胞增殖率小于N组,差异亦有统计学意义(p＜0.05).加用艾塞那肽干预后,H+G组细胞增殖率比H组下降,差异有统计学意义(p＜0.05);F+G组细胞增殖率比F组细胞增殖率升高,差异亦有统计学意义(p＜0.05). 4.流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,结果显示细胞凋亡率F组＞H组＞N组,差异有统计学意义(p＜0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞凋亡率小于F组(p＜0.05);H+G组细胞凋亡率小于H组(p＜0.05);差异都有统计学意义. 5.RT-PCR法测定各组细胞CHOP mRNA相对表达量,结果表明相对表达量是F组＞H组＞N组,差异有统计学意义(p＜0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞chop mRNA相对表达量小于F组(p＜0.05);H+G组细胞chop mRNA相对表达量小于H组(p＜0.05);差异均有统计学意义. 6.Western blot法测定各组细胞CHOP蛋白相对表达量,其结果与chop mRNA相对表达量一致,也是F组>H组>N组,差异有统计学意义(p＜0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞CHOP蛋白相对表达量小于F组(p＜0.05);H+G组细胞CHOP蛋白相对表达量小于H组(p＜0.05);差异均有统计学意义. 结论: 持续性高糖培养会刺激肾小球系膜细胞增殖,波动性高糖培养会抑制肾小球系膜细胞增殖.持续高糖培养和波动性高糖培养都会引起肾小球系膜细胞发生凋亡,而且波动血糖诱发凋亡的程度更大.持续高糖培养和波动性高糖培养可能会通过诱发CHOP信号通路介导的内质网应激凋亡通路进而引起系膜细胞发生凋亡,GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽可能会通过下调CHOP的表达减轻细胞凋亡的程度,从而发挥肾功能保护作用,因此能够预防和控制糖尿病肾病的发生和发展.