黄花柳花成分分析及其对缺氧环境大鼠心和脑的保护作用

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目的:建立黄花柳花中黄酮类成分薄层色谱(TLC)分析方法,测定其抗氧化活性。建立黄花柳花中黄酮类成分的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并测定其含量。研究黄花柳花醇提物对缺氧环境下大鼠心和脑的保护作用。方法:1.采用聚酰胺薄膜层析色谱法对黄花柳花中的黄酮类成分进行鉴别。2.采用高效液相色谱法,测定黄花柳花中芦丁、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的含量。并以芦丁为参照对照品,计算其与木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子,从而建立以芦丁为对照的一测多评分析方法。3.采用薄层生物自显影技术测定黄花柳花对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除能力,评价其抗氧化活性。4.使用人工实验舱模拟海拔6000m高度环境造成大鼠急性缺氧模型,红景天口服液为阳性药,通过急性毒性实验确定黄花柳花醇提物的给药剂量,检测大鼠血清、心脏和脑组织中MDA、LDH、SOD、CAT、GSH和CK等生化指标。结果:1.黄花柳花TLC色谱图显示,黄花柳花中含有芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。2.高效液相色谱法分析芦丁、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的线性范围分别为8.11~121.68μg·mL-1(r=0.9994),2.92~43.80μg·mL-1(r-=0.9995),4.13~61.92μg·mL-1(r=0.9995),2.04~30.60μg·mL-1(r=0.9995),2.05~30.78μg·mL-1(r=0.9990),含量分别为0.87mg/g、0.12mg/g、0.34mg/g、0.11mg/g和0.098mg/g;平均回收率(n=9)分别为100.25%(RSD=1.60%),98.24%(RSD=1.23%),101.57%(RSD=1.25%),98.45%(RSD=1.42%),101.30%(RSD=1.17%)。一测多评法相对校正因子分别为f木犀草素-7-O-β-D--吡喃葡萄糖苷/芦丁=1.49(RSD=1.84%)、f芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷/芦丁=2.26(RSD=2.26%)、f木犀草素/芦丁=2.63(RSD=1.01%)、f芹菜素/芦丁=2.86(RSD=1.55%),重复性良好。通过t检验,样品的一测多评法计算值与外标法测得值之间无显著性差异,实验所得的校正因子可信。3.黄花柳花的黄酮类成分对DPPH清除能力的IC50为2.4mg/mL,具有一定的抗氧化能力。薄层生物自显影技术分析显示芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有抗氧化活性。4.与模型组(缺氧24h和缺氧48h)比较,黄花柳花醇提物三个剂量组可明显降低大鼠血清和心脏组织MDA、LDH水平(P<0.01),升高大鼠血清和心脏组织SOD水平(P<0.01),升高血清和脑组织CAT和GSH水平(P<0.01),升高心脏组织和脑组织CK水平(P<0.01)。结论:1.通过系统研究,建立了以芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷为标示成分的黄花柳花黄酮类化合物的薄层色谱分析方法。2.建立出测定黄花柳花芦丁、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的HPLC分析方法和一测多评分析方法,为黄花柳花质量控制提供了依据。3.黄花柳花对DPPH清除能力测定和薄层生物自显影技术都证明黄花柳花具有抗氧化活性。4.黄花柳花醇提物具有明显预防缺氧环境下大鼠心肌和脑损伤的作用。
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