【摘 要】
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目的:探讨siRNA-YAP1对转化生长因子β_2(TGF-β_2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转分化(EMT)的抑制作用。方法:将人LECs株HLEB-3分为对照组及TGF-β_2组,TGF-β_2组用10 ng/ml TGF-β_2处理正在培养的细胞,采用Western blot法检测细胞EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在细
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目的:探讨siRNA-YAP1对转化生长因子β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮-间质转分化（EMT）的抑制作用。方法:将人LECs株HLEB-3分为对照组及TGF-β2组,TGF-β2组用10 ng/ml TGF-β2处理正在培养的细胞,采用Western blot法检测细胞EMT相关标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）在细胞中的表达变化;采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光、Western blot法检测Yes相关蛋白（YAP1）在细胞中的表达。设计siRNA-YAP1质粒,使用脂质体转染细胞,荧光显微镜下观察其转染效率;Western blot法检测siRNA-YAP1质粒对YAP1的抑制作用。将培养的细胞分为siRNA-NC（NC）、siRNA-YAP1组（si-YAP1）、siRNA-NC+TGF-β2组（NC+T）和siRNA-YAP1+TGF-β2组（si-YAP1+T）,分别将siRNA-NC质粒、最佳siRNA-YAP1质粒转染细胞,采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞中YAP1 m RNA及其蛋白的相对表达量;同时用细胞免疫荧光、Western blot法检测各组中HLECs EMT标志蛋白的表达变化。结果:TGF-β2组中E-cadherin蛋白（0.797±0.110）低于对照组（1.240±0.110）,TGF-β2组Vimentin蛋白（1.18±0.118）高于对照组（0.830±0.104）;TGF-β2组YAP1 m RNA（2.200±0.193）高于对照组（1.136±0.123）,TGF-β2组中YAP1蛋白（1.203±0.121）高于对照组（0.967±0.025）;TGF-β2组中YAP1蛋白荧光低于对照组;差异均有统计学意义（P<0.05）。si-YAP1组中YAP1蛋白（0.303±0.057）、YAP1 m RNA（0.576±0.108）,低于NC组的YAP1蛋白（1.327±0.021）、YAP1 m RNA（1.156±0.175）;si-YAP1+T组YAP1蛋白（0.320±0.104）、YAP1 m RNA（0.572±0.022）,低于NC+T组YAP1蛋白（1.453±0.021）、YAP1 m RNA（2.048±0.329）;差异均有统计学意义（P<0.05）;YAP1蛋白荧光表达在不同组中呈相同变化趋势。E-cadherin蛋白表达在NC+T组（0.560±0.029）低于NC组（0.817±0.037）、si-YAP1+T（0.744±0.092）高于NC+T组（0.560±0.029）、si-YAP1组（0.987±0.041）高于NC组（0.817±0.037）,差异均有统计学意义（P<0.05）;E-cadherin蛋白荧光表达在不同组中呈相同变化趋势。Vimentin蛋白表达在NC+T组（1.005±0.032）高于NC组（0.788±0.018）、si-YAP1+T（0.791±0.021）低于NC+T组（1.005±0.032）,差异均有统计学意义（P<0.05）;Vimentin蛋白在si-YAP1组（0.745±0.017）与NC组（0.788±0.018）表达差异无统计学意义（P>0.05）;Vimentin蛋白荧光表达在不同组中显示相同变化趋势。结论:YAP1参与TGFβ2组诱导的HLEB-3细胞EMT过程,siRNA-YAP1抑制TGF-β2诱导的人LECs EMT过程。
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