高致病力H5N1亚型禽流感的暴发不仅给世界养禽业造成巨大打击，而且给人类健康带来严重威胁，对于该病的防制具有重要的公共卫生学意义。疫苗免疫接种是防制高致病性H5N1亚型禽流感的重要手段，但禽流感病毒像所有的RNA病毒一样在传播过程中非常容易发生变异，使疫苗株与感染的病毒之间抗原差异较大而不能有效保护家禽。已知禽流感病毒的毒力和抗原性与其HA蛋白有密切关系，因此要控制禽流感首先要对毒株之间HA抗原性的差异进行研究。为此，本研究选用了4个不同年代、不同分离地点的毒株(CC毒株是04年分离于广东地区、GD毒株是96年分离于广东地区、QFY毒株是04年分离于东北地区、YC毒株是05年分离于东北地区)，首先经RT-PCR扩增了4株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA)，将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体上，经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体，将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒穿梭载体(bacmid)进行转座，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体(rBacmid-H5)。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞。通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约63Kd重组血凝素蛋白在sf9昆虫细胞中实现了高效表达，具有良好的血凝活性；而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制，说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。然后将所表达4种HA蛋白定量，用佐剂乳化后制成禽流感基因工程亚单位疫苗分别免疫1组3周龄SPF鸡。并在免疫后1-5周和攻毒后3周分别翅静脉采血并分离血清，将采集的血清分别用H5亚型禽流感病毒的不同毒株作为抗原进行交叉血凝抑制反应(HI)和中和试验，来检测抗体与不同毒株之间的交叉血凝抑制价和中和病毒的能力，并用A／Goose／HLJ／QFY／04毒株作攻毒保护试验以对这4株禽流感病毒的HA蛋白进行比较，从免疫水平上了解血凝素基因的差异；实验结果显示各组SPF鸡对强毒株的攻毒保护、排毒情况及对不同分离株的血凝抑制价有显著差别，GD蛋白免疫组对4个毒株的血凝抑制价最低普遍在临界保护值以下，并且对QFY毒株的攻击不能100％保护并有严重的排毒现象。CC和YC蛋白免疫组对QFY毒株的攻击能够全保护，但也有一定量的排毒。只有QFY蛋白免疫组对同源病毒的攻击产生非常好的保护力也没有排毒现象，而且对4种不同抗原都有较高的血凝抑制效价；从结果中可以看出96年分离的GD毒株与04／05年分离的几个毒株抗原性差异很大。CC和YC毒株的抗原性与QFY毒株也不相同，虽然能够有效保护但也会排毒。