论文部分内容阅读
本研究以脱脂玉米胚芽粕为原材料,提取、分离胚粕中的多肽并对其进行生理活性研究。（1）通过复合酶法提取玉米胚芽多肽,筛选出较高水解度以及多肽浓度的两种酶作为复合酶,单因素实验确定酶的复配比例、温度、p H、添加量以及提取时间等条件,再进行响应面法探究两个因素之间的交互影响,最终确定了最佳的提取条件:温度55℃,p H7.3,酶添加量1.80%,时间190min,测得提取液多肽浓度平均值为5.839mg/m L,与Design-Expert软件理论预测值相差3.63%。（2）根据最佳的提取条件进行提取,将提取到的玉米胚芽多肽粗酶解液分离纯化,制备具有高活性的纯化玉米胚芽多肽。首先经过单因素探究玉米胚芽多肽的脱色工艺:当p H为5、温度为40℃、活性炭的添加量为2%时,所得玉米胚芽多肽的脱色效果最佳,脱色率为75.71%,且脱色后的玉米胚芽多肽粗酶解液的DPPH清除率为68.49%。再经过单因素探究玉米胚芽多肽的超滤工艺,确定过膜压力为1.5bar、回流液流速为6 LMH、过膜的料液温度为25℃以及p H为自然p H值时为最佳的超滤条件。（3）QAE-Sephadex A-25阴离子交换层析将超滤所得的高DPPH自由基清除活性的组分进行进一步的纯化,得到DPPH清除率较高的ZF3-3、ZF3-4组分。将其分别过Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析,分离出具有最高活性的ZF3-4-2。最后通过Tricine-SDS-PAGE电泳图谱中可见分子量主要集中在稍>1.7k Da左右,在稍>1.7k Da区域呈现明显且较为单一的条带,说明前面几步的纯化起到了较好的效果。为下一步进一步探究玉米胚芽多肽的生理生化活性奠定基础（4）将分离出各步骤的样品分别冷冻干燥,配置成不同浓度的待测样品,测定几项抗氧化活性值,发现ZF3-4-2具有较高的抗氧化活性。ZF3-4-2的ABTS清除率为66.01%,其IC50值为0.233mg/m L,OH自由基清除率为66.92%,其IC50值为0.241mg/m L,FRAP值为10.17 mmol Fe2+/g,O2-含量46.06μmol/mg prot;同时测定其ADH以及ALDH激活活力的大小,判断各组组分的体外醒酒活性的强弱,而ZF3-4-2具有较高的ADH以及ALDH激活活力,其中ADH激活率为59.27%,ALDH激活率为63.13%。（5）建立小鼠急性醉酒模型,对小鼠醒酒护肝活性的进行研究。实验可得:小鼠的醒酒时间、血清乙醇浓度、血清GOT以及GPT活力、肝脏指数、以及肝脏匀浆的GSH浓度和ADH、ALDH、SOD活力。实验发现经过提前饲喂高剂量ZF3-4-2的小鼠醉酒时间延长,为39.72min,醒酒时间缩短为67.20min;且小鼠的血清乙醇浓度在30min后为1.493mg/m L,60min后为1.918mg/m L,120min后为1.186mg/m L;小鼠的肝脏匀浆检测出活力达到50.44 U/m L的ADH以及活力达到149.46 U/m L的ALDH;小鼠血清中检测出GOT活力只有25.23 U/L且GPT活力为37.04 U/L;小鼠的肝脏指数为4.88%;小鼠肝脏匀浆中的GSH含量达到了17.70μmol/L;小鼠肝脏匀浆的SOD活力达到294.05U/mg prot。