舌鳞癌细胞外泌体活化成纤维细胞转化为癌相关成纤维细胞功能研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Sherryduandian
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[目的]探究舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcinoma,TSCC)来源的外泌体对正常成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs)增殖,迁移等生物学特性的影响,并通过转录组高通量测序结果,探索TSCC来源的外泌体对成纤维细胞生物学特性改变的相关机制,以期为口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)肿瘤微环境中细胞互动过程提供实验基础,也为OSCC的靶向治疗提供不同的思路。[方法](1)TSCC外泌体对NFs的生物学影响:培养TSCC细胞株(CAL-27、HSC-4和UMSCC6),从其上清液中提取并鉴定TSCC外泌体,将外泌体分别作用于NFs,通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,采用Q-PCR法检测TSCC来源的外泌体刺激NFs后癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)相关基因α-SMA、FAP的表达水平,采用免疫印迹法(Western blot,WB)检测TSCC来源的外泌体刺激NFs后CAFs相关蛋白α-SMA、FAP的表达情况。(2)转录组高通量测序:TSCC来源外泌体分别刺激NFs,并提取其RNA,并进行高通量测序。利用高通量测序技术检测所得的RNA表达谱,筛选出差异RNA,对差异RNA进行KEGG富集分析,并通过Q-PCR法验证高通量测序结果。[结果](1)TSCC外泌体对NFs的生物学影响:3株TSCC来源外泌体包膜完整,呈圆形或椭圆形,并且都能特异性表达HSP90和TSG101蛋白,粒径测得3株TSCC来源的外泌体粒径主要集中在30-150nm之间。3株TSCC来源的外泌体处理NFs 48h后,细胞的增殖能力都明显增强(P<0.01)。TSCC外泌体刺激NFs 12h、24h后,NFs迁移率明显加强(P<0.01)。CAL-27与UMSCC6来源外泌体处理NFs 48h后,α-SMA、FAP基因的转录水平上升,HSC-4来源的外泌体处理NFs 48h后,α-SMA基因的转录水平上升。3株TSCC来源外泌体处理NFs 48h后,α-SMA、FAP蛋白的表达均增强(P<0.05)。(2)转录组高通量测序:与对照组相比,CAL-27-exo组RNA差异表达有2262个,其中上调1191个,下调1071个,HSC-4-exo组RNA差异表达有1691个,其中上调746个,下调945个,UMSCC6-exo 1组RNA差异表达有5935个,其中上调2848个,下调3087个。生物信息学分析表明上述差异表达的RNA参与了 NFs活化的过程。最后在|log2foldchange|值≥1.5,P<0.05范围中随机选取6个差异表达RNA,通过Q-PCR验证了高通量测序的可靠性。[结论]TSCC来源的外泌体可能促使NFs转化为CAFs。TSCC来源的外泌体诱导NFs转化为CAFs过程中可能涉及多条信号通路。
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