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目的: 通过观察华蟾素(Cinobufacini)对人食管癌细胞Eca109体外增殖及bcl-2、DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases DNMT)、P16mRAN表达的影响，探讨华蟾素对人食管癌细胞Eca109的抑制作用及可能的作用机制。 方法: 1.分别用浓度为0、0.2、1、5、10、20、50mg/ml华蟾素作用人食管癌Eca109细胞48h，用MTT比色法检测华蟾素作用后对Eca109细胞体外增殖的影响。 2.用Hoechest33258染色法激光共聚焦显微镜观察不同浓度华蟾素对Eca109细胞凋亡形态的影响。 3.Annexin-V/PI双染流式细胞技术检测不同浓度华蟾素对Eca109细胞凋亡的影响。 4.PI染色流式细胞技术检测不同浓度华蟾素对Eca109细胞周期的影响。 5.采用荧光定量RT-PCR检测不同浓度华蟾素对Eca109细胞bcl-2、DNMT1、DNMT3A、 DNMT3B、 P16 mRAN表达水平的影响。 结果: 1.MTT法检测不同浓度华蟾素对Eca109细胞增殖抑制作用，结果显示华蟾素能抑制Eca109细胞增殖，不同浓度华蟾素（0.2、1、5、10、20、50mg/ml）的抑制率分别为(15.26％、27.42％、44.09％、55.60％、67.03％、67.03％)，采用OD值作为统计数据，差异有统计学意义(F=266.17，P＜0.05)。 2.Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜下观察华蟾素处理过的Eca109细胞形态，结果显示:细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染及细胞凋亡小体等细胞凋亡形态。 3.流式细胞仪检测显示华蟾素可以促进Eca109细胞凋亡且随药物浓度增加凋亡率增加。不同浓度华蟾素（0、1、5、10 mg/ml）致Eca109细胞凋亡率分别为(1.33％、14.90％、23.43％、31.26％; F=87.06, P＜0.05)。 4.流式细胞仪检测细胞周期显示华蟾素可以将Eca109细胞阻滞在细胞周期的S期和G2/M期。不同浓度（0、1、5、10 mg/ml）S期比例分别为(20.75％、23.42％、28.44％、33.60％; F=35.70，P＜0.05); G2/M期比例分别为(16.47％、26.65％、42.56％、51.42％; F=97.43, P＜0.05)。 5.qRT-PCR检测结果显示，华蟾素能下调Eca109细胞bcl-2 mRNA的表达，差异有统计学意义(F=536.51，P＜0.05)。 6.qRT-PCR检测结果显示华蟾素对Eca109细胞p16 mRNA表达无明显影响，差异无统计学意义(F=0.671，P＞0.05)。 7.qRT-PCR检测结果显示华蟾素对Eca109细胞DNMT1 mRNA的表达无明显影响，差异无统计学意义(F=0.807，P＞0.05)，但华蟾素可下调DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达，差异有统计学意义(F=115.08，P＜0.05; F=143.20，P＜0.05)。 结论: 1.华蟾素对人食管癌细胞具有增殖抑制作用，其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性。 2.Hoechest33258染色显示华蟾素能诱导Eca109细胞凋亡。 3.流式细胞周期结果表明华蟾素可将Eca109细胞阻滞在S期及G2/M期。 4.RT-PCR结果显示华蟾素能下调bcl-2 mRNA的表达，这可能为华蟾素诱导Eca109细胞凋亡的机制之一。 5.华蟾素不能通过调节DNA甲基转移酶的表达或直接作用于p16来上调p16基因的表达。