猪链球菌是一种革兰氏阳性兼性厌氧型致病菌,临床上可导致猪败血症,脑膜脑炎,关节炎,心内膜炎等,是中国猪源链球菌病的主要病原,对我国的养猪业造成重大影响。2005年我国四川资阳爆发的人感染猪链球菌疫情导致数十人死亡造成了重大财产损失,对我国公共卫生安全构成重大威胁。本实验室曾对2003-2007年分离的407株猪链球菌进行了流行病学分析,包括血清型、基因型和毒力因子基因检测,并且对2003-2008年从临床发病猪中分离的126株猪链球菌进行了耐药性检测。从2007年之后,并没有全国范围的猪链球菌流行病学调查分析。本研究的主要内容为2008-2012年猪链球菌的流行病学调查,包括血清型鉴定,耐药性检测,猪链球菌3型的基因型及致病力检测；并分析了猪链球菌毒力因子基因与耐药性的关系；另外,对本实验室鉴定的毒力相关因子HP0197进行了基因多态性的检测与分析。1.猪链球菌分离鉴定及耐药性分析本研究对2008-2012年从发病猪中分离的猪链球菌进行了流行病学调查分析,包括血清型,毒力因子基因检测,17种抗生素的耐药性检测,结果显示：2008-2012年共从8111份病料中分离猪链球菌1286株,分离率为15.9%。对其中351株进行了血清型鉴定,共分离到99株2型菌株,猪链球菌2型的分离率显著高于其它血清型(P<0.01),表明2型依然是中国猪链球菌优势血清型。近4年(2009-2012年)分离的猪链球菌耐药性检测结果显示：猪链球菌对四环素、红霉素、阿奇霉素、克林霉素4种药物的耐药率均在89%以上,其它药物耐药率均在20%以下,共发现22种耐药谱。本研究还对27株猪链球菌的71种毒力因子基因进行了PCR检测,发现多重耐药(耐药数大于4)猪链球菌毒力因子基因携带率显著低于非多重耐药(耐药数小于等于4)菌株(P<0.01),从而证明猪链球菌的耐药性与毒力因子基因分布存在负相关性。对试验菌株进行MLST基因型检测,发现多重耐药菌株以不能分型分主,非多重耐药菌株以ST1(ST7)为主。对试验菌株进行血清型检测,发现多重耐药菌株以无法定型为主,而非多重耐药菌株以2型和3型为主,暗示多重耐药菌株与非多重耐药菌株在血清型和基因型上均存在明显的差异。2.猪链球菌血清型和耐药性流行趋势分析对近5年(2008-2012年)分离的猪链球菌血清型分布情况与本实验室2003-2007年血清型分布做比较分析,结果显示：猪链球菌2型的分离率略有降低,猪链球菌3型的分离率升高。对近4年(2009-2012年)分离的猪链球菌耐药性检测数据与2003-2008年耐药性数据比较分析,结果显示：猪链球菌的耐药谱从11种增加到22种；耐药谱为四环素、红霉素、克林霉素和阿奇霉素4种抗生素的菌株从55.6%增加至69.4%,发现了耐受7、8、10和12种抗生素的耐药谱；17种抗生素中红霉素、阿奇霉素、克林霉素、氯头孢菌素、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢呋辛的耐药率均增加,表明猪链球菌耐药性更加严重了。3.猪链球菌3型基因型及致病力检测本研究对2008-2012年从发病猪中分离的66株猪链球菌3型菌株进行了基因型和致病力检测,共分离55株基因型为mrp+sly+ef-的菌株,占83.3%；分离6株基因型为mrp+sly+ef+的菌株,占9.1%；分离3株基因型为mrp-sly+ef-的菌株,占4.5%；分离2株基因型为mrp-sly-ef-的菌株,占3.0%。表明猪链球菌3型的主要基因型为mrp+sly+ef-。对6株基因型为mrp+sly+ef+的3型菌株进行了小鼠毒力检测,发现5株菌株对小鼠有明显的致病力。并检测到1株对小鼠高致病性的强毒3型菌株。4.hp0197基因多态性分析对猪链球菌新发现的毒力相关因子HP0197做分子流行病学分析。分析了13个全基因组序列中的hp0197基因座位,并对56株不同血清型的菌株进行了PCR扩增,鉴定了其中36株存在hp0197基因,结果显示：hp0197基因广泛存在于1/2、1、2、3、4、5、7、8、9、11、14、17、18、19、23、25、29、33型和不能分型菌株中,并存在大量的基因多态性。17株猪链球菌2型均存在hp0197基因,其中15株菌株的hp0197基因碱基数为1686bp,相似性大于99%,暗示猪链球菌2型的hp0197基因高度保守,可能作为猪链球菌2型新的鉴定靶点。鉴定了hp0197基因在前端130bp和后端700bp存在保守区。