【摘 要】
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目的探索人诱导性多能干细胞(hiPSCs)在神经分化相关因子作用下生成的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对成体造血的影响。方法1)与神经相关的N-MSCs的获得:hiPSCs
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目的探索人诱导性多能干细胞(hiPSCs)在神经分化相关因子作用下生成的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对成体造血的影响。方法1)与神经相关的N-MSCs的获得:hiPSCs在向前脑类器官分化过程中分离纯化出一个性质稳定的细胞系,命名为N-MSCs。通过形态学观察、流式检测和向脂肪、成骨、软骨细胞分化实验对N-MSCs进行鉴定。2)分别对N-MSCs和脐带(umbilical cord)MSCs(UC-MSCs)进行转录组测序,比较二者的遗传学差异。3)N-MSCs对成体造血的影响:人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)与鼠AGM-S3细胞共培养10 d获得的CD34+细胞分别与AGM-S3(AGM-S3组)、N-MSCs(N-MSCs组)进行2次共培养,CD34+细胞单独悬浮培养为对照组(34+组),在不同时间点通过流式细胞术、集落形成能力检测、MGG染色对实验结果进行分析。4)N-MSCs对人脐带血来源的巨噬细胞(cord blood macrophage,CB-Mφ)的影响:Mφ与UC-MSCs(M+UC-MSCs 组)、N-MSCs(M+N-MSCs组)在transwell中共培养3d,对照组为Mφ的单独培养(M组),共培养后得到的Mφ再在IL-4作用下培养24h。通过MGG染色、流式细胞术、qRT-PCR等方法对Mφ形态学、M2型Mφ相关表面标记和基因表达情况进行分析。结果1)N-MSCs满足真正MSCs的鉴定标准。2)转录组测序分析结果表明N-MSCs与炎症反应、血管生成、突触的形成等有密切关系。3)CD34+细胞单独悬浮培养、分别与AGM-S3、N-MSCs共培养10 d后:N-MSCs组收获的CD34+CD45+细胞数量分别是34+组和AGM-S3组的6.67倍、4.63倍(P<0.01);Mφ的数量分别是34+组和AGM-S3组的1.45倍、1.65倍(P<0.05)。4)在集落培养中,CD34+细胞与N-MSCs共培养4 d后的细胞向Mix和Mφ集落的分化潜能较强。5)M+N-MSCs组中M2型Mφ的表面标记CD206的表达量分别是M组、M+UC-MSCs 组的 1.28、1.07 倍(P<0.01、P<0.05);IL-10 基因相对表达量分别是M组、M+UC-MSCs组的3.0、1.19倍(P<0.01)。结论N-MSCs能促进成体造血和CB-Mφ向M2型Mφ的转变。
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