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目的:观察补肾安胎方及其补肾、活血组分对控制性超促排卵(Controlled OvarianHyperstimulation,COH)小鼠胚泡着床期类肝素结合表皮生长因子(heparin-bindingepidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)及其受体的影响,探讨补肾安胎方及其拆方对着床环节的作用机制,明确两拆方组分间是否存在选择或协同作用;为补肾、活血法治疗不孕症提供现代理论依据。
方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组和活血组。模型组和中药组于5pm 腹腔注射PMSG 10IU,48小时后腹腔注射HCG 10IU,于注射HCG 当晚按雌雄比例1:1~2 合笼,次日早晨7:00~8:00 检查雌鼠阴道,发现阴栓者计为妊娠第1天(Pd1,pregnant day 1)。模型组和正常组于注射PMSG日起每日上午8 时灌服双蒸水0.3ml,中药组灌服中药0.3ml。正常组未经超促排卵而合笼。于妊娠第5、6天收集小鼠子宫标本。观察小鼠Pd1(Pregnant day1)阴栓率、Pd6 妊娠率、孕鼠着床位点数;采用RT-PCR 方法测定Pd5、6 子宫内膜HB-EGF mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定同时期子宫内膜EGFR蛋白的表达。
结果:
1、各组小鼠阴栓率、妊娠率和着床位点数比较模型组阴栓率、妊娠率较正常组显著降低,着床位点数显著升高;中药治疗后各组阴栓率、妊娠率较模型组显著升高,但是,着床位点数显著降低,以补肾安胎组更为明显;活血组阴栓率高于补肾组,着床位点数较补肾组降低,妊娠率上两组无明显差异。
2、各组小鼠胚泡实物图比较正常组小鼠胚泡呈串珠状,均匀分布于两侧子宫,伊文思蓝着色均匀;模型组小鼠胚泡数多,相互融合,大小不等,分布不均,伊文思蓝着色深浅不一;中药组小鼠胚泡数较模型组少,大小及分布较均匀。其中补肾安胎组胚泡呈串珠状,大小及分布均较补肾组、活血组均匀,伊文思蓝着色较接近正常组;补肾组和活血组之间比较:活血组胚泡分布及着色均较补肾组颗大均匀。
3、RT-PCR 结果比较正常组HB-EGF mRNA表达最高,模型组显著低于正常组,中药组显著高于模型组。各中药组比较:活血组高于补肾组,补肾安胎组显著高于活血组;Pd6 HB-EGFmRNA表达量较Pd5 降低。
4、免疫组化结果比较EGFR表达在着床期子宫内膜腺体和基质细胞胞质中,5组小鼠EGFR蛋白表达空间分布无明显差异。正常组腺体致密,腺上皮细胞核中EGFR表达丰富,子宫内膜细胞质中也有大量表达;模型组腺体稀疏,腺上皮细胞核中EGFR表达较少,部分缺失,内膜间质细胞中几乎无表达;中药组腺体和间质中EGFR表达量均高于模型组;其中活血组高于补肾组,补肾活血组高于活血组。
结论:补肾安胎方及补肾、活血组分能够改善超排卵小鼠的着床率,妊娠率,促进胚泡生长和HB-EGF及其受体的表达;补肾、活血组分在改善胚泡着床过程中具有协同作用。
方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组和活血组。模型组和中药组于5pm 腹腔注射PMSG 10IU,48小时后腹腔注射HCG 10IU,于注射HCG 当晚按雌雄比例1:1~2 合笼,次日早晨7:00~8:00 检查雌鼠阴道,发现阴栓者计为妊娠第1天(Pd1,pregnant day 1)。模型组和正常组于注射PMSG日起每日上午8 时灌服双蒸水0.3ml,中药组灌服中药0.3ml。正常组未经超促排卵而合笼。于妊娠第5、6天收集小鼠子宫标本。观察小鼠Pd1(Pregnant day1)阴栓率、Pd6 妊娠率、孕鼠着床位点数;采用RT-PCR 方法测定Pd5、6 子宫内膜HB-EGF mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定同时期子宫内膜EGFR蛋白的表达。
结果:
1、各组小鼠阴栓率、妊娠率和着床位点数比较模型组阴栓率、妊娠率较正常组显著降低,着床位点数显著升高;中药治疗后各组阴栓率、妊娠率较模型组显著升高,但是,着床位点数显著降低,以补肾安胎组更为明显;活血组阴栓率高于补肾组,着床位点数较补肾组降低,妊娠率上两组无明显差异。
2、各组小鼠胚泡实物图比较正常组小鼠胚泡呈串珠状,均匀分布于两侧子宫,伊文思蓝着色均匀;模型组小鼠胚泡数多,相互融合,大小不等,分布不均,伊文思蓝着色深浅不一;中药组小鼠胚泡数较模型组少,大小及分布较均匀。其中补肾安胎组胚泡呈串珠状,大小及分布均较补肾组、活血组均匀,伊文思蓝着色较接近正常组;补肾组和活血组之间比较:活血组胚泡分布及着色均较补肾组颗大均匀。
3、RT-PCR 结果比较正常组HB-EGF mRNA表达最高,模型组显著低于正常组,中药组显著高于模型组。各中药组比较:活血组高于补肾组,补肾安胎组显著高于活血组;Pd6 HB-EGFmRNA表达量较Pd5 降低。
4、免疫组化结果比较EGFR表达在着床期子宫内膜腺体和基质细胞胞质中,5组小鼠EGFR蛋白表达空间分布无明显差异。正常组腺体致密,腺上皮细胞核中EGFR表达丰富,子宫内膜细胞质中也有大量表达;模型组腺体稀疏,腺上皮细胞核中EGFR表达较少,部分缺失,内膜间质细胞中几乎无表达;中药组腺体和间质中EGFR表达量均高于模型组;其中活血组高于补肾组,补肾活血组高于活血组。
结论:补肾安胎方及补肾、活血组分能够改善超排卵小鼠的着床率,妊娠率,促进胚泡生长和HB-EGF及其受体的表达;补肾、活血组分在改善胚泡着床过程中具有协同作用。