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【目的】实时定量PCR检测侵袭性牙周炎患者、慢性牙周炎患者和牙周建康人群龈下菌斑中Aa及其CDT蛋白的编码基因cdt基因中的分布,为进一步研究Aa CDT功能以及Aa CDT分子致病机制提供流行病学研究数据。【方法】Aa 16 s rDNA及cdtB基因序列为目的基因设计特异性探针引物,厌氧培养Aa,提取细菌基因组DNA,并进行PCR扩增目的片段。目的片段经纯化后与pMD 19-T Vector载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞中。用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,通过PCR及DNA片段测序鉴定其特异性。根据OD值确定质粒浓度,序列稀释制备Real-time PCR梯度浓度参考标准品,构建标准曲线。采集临床龈下菌斑,提取基因组DNA,实时定量PCR检测199例龈下菌斑样本,其中105例样本来自10位侵袭性牙周炎患者,79例样本来自10位慢性牙周炎患者,15例样本来自5位牙周健康者。针对采样对象的临床诊断及采样位点的临床指标,结合real-time PCR数据进行统计学分析。【结果】构建了分别含有Aa 16s rDNA和Aa cdtB片段的重组质粒pMD19-T-16s rDNA和pMD19-T-cdtB,经测序鉴定与已公布的基因序列同源性达100%。用这两种质粒标准品构建的标准曲线的线性相关系数分别为0.987和0.980。Real-time PCR检测Aa 16s rDNA和Aa cdtB的敏感阈值为10至107拷贝。实验数据显示侵袭性牙周炎患者龈下菌斑中的Aa数量以及cdt基因数量显著高于慢性牙周炎及牙周健康者(P<0.05)。【结论】本实验设计的引物和探针特异性良好,与其他细菌间无交叉反应。Aa 16 s rDNA及cdtB目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得线性关系良好的标准曲线。本实验成功建立了Real-time PCR检测龈下菌斑样本中Aa及其毒素基因cdt的方法。Real-time PCR是用以检测龈下菌斑中Aa及其毒素基因cdt快速可靠的方法。实验数据表明Aa及其cdt基因广泛存在于侵袭性牙周炎患者、慢性牙周炎患者龈下菌斑中。大部分Aa均携带有cdt基因。