【摘 要】
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莆田黑猪具有适应性强、耐粗饲料、生长快、产仔多、抗病力强等特性。作为濒危品种,亟待保护。随着体细胞核移植技术的发展,这种技术在保种上有了重要的应用价值。本实验是基
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莆田黑猪具有适应性强、耐粗饲料、生长快、产仔多、抗病力强等特性。作为濒危品种,亟待保护。随着体细胞核移植技术的发展,这种技术在保种上有了重要的应用价值。本实验是基于保种目的的体细胞核移植技术的研究,研究了猪体细胞核移植相关技术环节,主要内容如下:1.供体细胞系的建立利用不同的方法建立供体细胞系,比较了各种方法的优缺点,(1)利用组织块法和酶消化法建立猪耳成纤维细胞系,(2)胰酶消化法和机械刮取法建立了输卵管上皮细胞系,(3)分离培养猪卵泡液中的颗粒细胞。实验结果表明,由组织块法得到的猪耳成纤维细胞系生长状态最好而且又能避免对猪只的损伤,是理想的建系材料。2.卵母细胞体外成熟和孤雌激活优化了卵母细胞体外成熟体系:(1)NCSU-23培养液培养的卵母细胞体外成熟率(67.83%)显著高TCM-199培养的组(58.14%)(P<0.05)(2)NCSU-23+10% FBS+10%pFF(77.21%),比NCSU-23+10%pFF(72.02%)的成熟效果略高。且囊胚率二者(30.38%和29.70%)都显著高于NCSU-23+10%FBS(21.32%)。(3)NCSU-23培养液中添加EGF对成熟率影响不大,但在孤雌激活后,卵裂率、囊胚率上,添加EGF的培养基效果更好(4)经5℃冷藏和-18℃冻存的卵母细胞NCSU-23成熟培养基用于卵母细胞的成熟培养,其成熟率,孤雌激活后的卵裂率、囊胚率均无显著差异(P>0.05)。经多次孤雌激活实验表明,孤雌激活后,NCSU-23培养液和TCM-199培养液在卵裂率、囊胚率都无显著差异(P>0.05),以2.0kv/cm,60μs,1DC的处理效果最佳。
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