同型半胱氨酸诱导大鼠肾纤维化模型及其MRI评价

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目的通过鼠尾静脉注射同型半胱氨酸溶液(Homocysteine,Hcy)制作大鼠肾纤维化模型,使用以腰大肌信号强度标准化的T2WI信号强度值以及Gd-DTPA,MnO2@BSA动态MRI增强检查参数评估、监测大鼠肾纤维化的程度,并与最终组织病理学结果进行对照分析,以评价MnO2@BSA增强MRI检查评估、监测肾纤维化进程的可行性,并与常规MRI参数进行比较。材料与方法实验对象为健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠38只(200g-300g,226±25g),经鼠尾静脉注射4.5mg/kg Hcy溶液,注射Hcy溶液后大鼠死亡6只,麻醉意外死亡3只,剩余29只大鼠完成所有MRI检查并入组分析。在肌注2%戊巴比妥钠(0.15ml/100g体重)麻醉状态下,使用3.0T MRI仪(HD750通用电气医疗公司,密尔沃基,美国)和5.0cm孔径动物线圈(江苏万康医疗科技有限公司)于Hcy注射前(0d)、注射后1d、2d、3d、6d、11d、16d、20d及27d行横轴位脂肪抑制快速恢复快速自旋回波(fast recovery fast spin echo,FRFSE)T2WI及冠状位Gd-DTPA DCE MRI检查;于Hcy溶液注射前(0d)、注射后1d、3d、6d、11d、16d、20d及27d行及MnO2@BSA增强MRI检查。利用Image J软件(National Institutes of Health开发的图像处理软件)在T2WI图像上测量双肾门水平皮质(CO)、外髓外带(OSOM)、外髓内带(ISOM)及腰大肌信号强度,利用以上肾脏各带平均信号强度与腰大肌信号强度的比值来校准信号获得标准化信号强度(standardlized signal intensity,SSI)。应用SPSS19.0分析软件使用独立样本t检验,比较各时间点之间CO、OSOM、ISOM区域内的SSI值及Gd-DTPA DCE MRI检查及MnO2@BSA增强MRI T1WI CO和髓质(M)SI值。当P<0.05时认为差异具有统计学意义。除正常组外,每个时间点随机选取2-4只大鼠处死取双肾标本行组织病理学检查。结果1.大鼠肾纤维化T2SSI变化特征:Hcys溶液注射前,正常大鼠肾CO(2.48±0.36)与OSOM(2.41±0.36)无法区分,呈中等信号强度;ISOM呈相对高信号(2.91±0.46)。注射Hcys溶液后2d,CO呈带状高信号(3.19±0.098,P<0.05),与OSOM分界清晰。3d时CO信号下降(2.69±0.40),但仍高于正常(P<0.05);而后持续增高(P<0.05);OSOM与ISOM信号变化与CO相同。2.大鼠肾纤维化Gd-DTPA DCE MRI检查特征:造模后1d,肾Kcl开始急剧下降,明显低于正常水平;2d Kcl仍持续下降,3d Kcl轻度升高,但仍明显低于正常水平,此后维持在一个平台。3.大鼠肾纤维化MnO2@BSA增强MRI检查特征:Hcy注射前,大鼠肾CO、M均明显强化,M强化程度高于CO。Hcy注射后1d,大鼠肾CO、M强化程度均略减低。此后,肾CO、M强化程度均持续增高。造模后大鼠肾M强化程度与造模前大鼠M强化程度的差值代表肾小球对MnO2@BSA的漏出,于造模后3d开始持续增高。4.大鼠肾脏组织病理学改变:Hcy注射后1d-2d,可见肾小球毛细血管内皮细胞肿胀,肾脏各区域肾小管上皮细胞明显水肿;3d后,肾小管上皮细胞结构紊乱,肾小球结构损伤;11d后,肾小球结构破坏;16d后,肾小球损伤严重,肾小管上皮细胞细胞空泡变性。结论1.经鼠尾静脉注射Hcy溶液可以诱导大鼠肾纤维化模型,其成型快,操作简单。2.MRI检查T2WI校正信号强度值与组织病理学对照分析显示,Hcy诱导大鼠肾损害是一个动态多时相变化的过程,MRI检查T2WI可可靠和敏感的检测肾脏病变。3.Gd-DTPA DCE-MRI增强检查显示造模后1-2d肾Kcl开始急剧下降,于造模后第3天开始维持在一个平台,明显低于正常水平。4.MnO2@BSA增强MRI检查显示造模后大鼠对MnO2@BSA的漏出持续增高,与病理检查所示Hcy肾损伤病变位置主要为肾小球一致。
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