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本研究是从抗旱、耐盐植物柽柳中克隆MnSOD基因,构建到酵母表达载体pYES2上,并对其进行酿酒酵母的遗传转化,验证柽柳MnSOD基因的功能。主要实验结果如下: (1) 根据已克隆得到的柽柳MnSOD基因片段,采用RACE技术从柽柳中获得MnSOD的cDNA全长序列,699bp完整的开放读码框,编码232个氨基酸。其5非编码区为40bp,3非编码区为333bp。经生物信息学分析该蛋白质的等电点为7.10,分子量为26KD。 (2) 将MnSOD基因与酵母表达载体pYES2连接,获得了pYES-SOD重组质粒。将pYES-SOD转化酵母菌INVScl。随机挑选4个INVScl(pYES-SOD)单菌落,经PCR扩增证明MnSOD基因已构建到pYES2载体上。 (3) 对INVScl(pYES-SOD)和INVScl(pYES2)菌株进行诱导,研究外源基因MnSOD在酵母中的的表达情况。结果表明,INVScl(pYES-SOD)重组酵母经诱导后能够表达外源基因,超氧化物歧化酶活性最高达2.064U/g·min。 (4) 重组酵母INVScl(pYES-SOD)的NaCL、NaCO3、NaHCO3、干旱、紫外线等胁迫实验证明,INVScl(pYES-SOD)酵母的抗逆性明显高于对照INVScl(pYES2)菌株,实验结果说明在酵母受到逆境胁迫时,MnSOD基因表达的超氧化物歧化酶对酵母细胞起到了保护作用,同时也证实了来源于柽柳的MnSOD基因具有提高真核生物抗逆性的功能。 (5) 经RT-PCR、Southern印迹杂交检测表明,NaHCO3和NaCl胁迫处理能够使柽柳植物体内的MnSOD基因表达量明显升高,说明柽柳MnSOD基因与抗盐碱相关。