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多蛋白桥梁因子MBF1是一类广泛存在于真核生物和古菌,在结构和功能上都高度保守的蛋白。MBF1是调控新陈代谢及其他途径基因转录的一种非DNA结合转录辅激活因子,通过桥联不同的转录因子和TATA盒结合蛋白（TBP）以增强转录。目前,关于MBF1的研究报道主要集中在高等动植物上,关于低等真核生物MBF1的报道还不多。研究发现酵母MBF1（yMBF1）是其14-3-3蛋白（BMH2）的相关蛋白之一;现有研究也表明yMBF1和BMH2均参与了生物的胁迫应答调控,但至今没有BMH2与yMBF1相互作用与酵母生命关系的进一步报道。为了解yMBF1和BMH2在代谢调控中的功能以及二者的相互作用关系,本研究通过GST-pull down技术,从酵母S288c细胞中分别分离鉴定了yMBF1、BMH2的靶蛋白。yMBF1与其靶蛋白作用参与了减数分裂、细胞周期、孢子形成等转录调控;此外还参与了氧化磷酸化、氧化应激等过程。BMH2与靶蛋白作用广泛参与了DNA复制、转录、翻译、糖代谢、细胞骨架、细胞内吞、减数分裂、细胞周期、细胞生长等在内的各种调控过程。Pull down结果表明yMBF1与BMH2在体外存在相互作用。本研究得到了多个yMBF1潜在作用的转录因子,为后续研究BMH2在yMBF1参与靶基因的转录调控机制研究提供了基础。为了解yMBF1和BMH2在代谢调控中的关系,本研究对与BMH2、yMBF1作用的蛋白进行了交叉分析,发现43个可能的与二者均作用的蛋白。这些蛋白的功能涉及到染色体结构、转录、氧化磷酸化、胁迫应答、细胞周期等过程。为了解yMBF1和BMH2在胁迫应答中的功能,本研究检测了bmh2（-）/（+）、mbf1（-）/（+）菌株在热胁迫中的生长情况。结果表明yMBF1和BMH2均参与酵母的热胁迫应答,但表现出相互制约的关系;yMBF1对酵母抵御热胁迫是必要存在的,BMH2制约了酵母的热胁迫抗性。本课题组前期研究发现yMBF1可以提高酵母对Cu2+的耐受能力,本研究发现Cu2+相关蛋白ICS2是BMH2的靶蛋白之一;进一步研究发现,缺失bmh2后酵母的Cu2+耐受能力下降。转录组测序结果表明,缺失mbf1后ics2的表达量下调,ics2可能是受mbf1调控的下游基因。本研究以酵母14-3-3蛋白BMH1为对照,发现同源性达到93%的BMH2和BMH1在热胁迫和Cu2+胁迫调控中存在差异;二者均呈负调控热胁迫,但BMH2发挥了更主要的作用;在Cu2+胁迫中BMH2呈现正相关调控,BMH1则是负相关调控。综上所述,本研究在蛋白组水平对酵母S288c的yMBF1和BMH2在代谢调控中的功能进行了初步研究;探讨了二者在代谢调控中潜在的联系;进一步检测了yMBF1和BMH2在胁迫应答中的作用。最后本研究通过抗体芯片技术制备了2株yMBF1的单克隆抗体P12和P14,对应的抗原表位为RGNNIGSPLGAPKK;从小鼠腹水中纯化了BMH2的单克隆抗体;为进一步在体内对yMBF1和BMH2在代谢调控中的功能及相互作用研究提供了基础。