论文部分内容阅读
目的：通过测定RMP在人非小细胞肺癌组织和细胞系中的表达水平,来研究RMP与肿瘤病人临床病理特征的联系,同时探索其对NSCLC细胞生物学功能的影响,为NSCLC的基因靶向治疗提供强有力的依据。方法：1.通过qRT-PCR检测RMP在NSCLC细胞系和正常细胞系中的mRNA表达水平,同时用western blot检测RMP相应的蛋白表达水平。2.通过qRT-PCR检测RMP在人非小细胞肺癌组织和相应癌旁组织中的mRNA表达水平,同时用western blot检测RMP相应的蛋白表达水平。3.通过qRT-PCR检测RMP在不同特征NSCLC组织样本中的mRNA表达水平,分析其与肿瘤临床病理特征的联系,同时用表格统计病人的相关临床信息。4.荧光显微镜检测各组RMP质粒在NSCLC细胞A549中的瞬时转染情况,同时用qRT-PCR和western blot检测转染效率。5.通过CCK-8试验检测RMP对A549细胞增殖的影响。6.用不同浓度的吉非替尼处理转染了各组不同RMP质粒的A549细胞,通过CCK-8试验、流式细胞术检测RMP对A549细胞化疗敏感性的影响。7.通过CCK-8试验、流式细胞术检测RMP对A549细胞放疗敏感性的影响,同时用western blot检测细胞凋亡相关基因的蛋白表达水平。8.通过流式细胞术检测RMP对于A549细胞周期的影响,同时用western blot检测周期相关基因的蛋白表达水平。9.通过迁移和侵袭试验检测RMP对A549细胞迁移和侵袭能力的改变。10.通过裸鼠皮下移植瘤实验观察RMP对移植瘤生长情况的影响,同时用免疫组化检测RMP、Bax、Bcl-2和capase-3的蛋白表达情况。结果：1.qRT-PCR和western blot实验结果显示：无论是mRNA和蛋白表达水平,RMP在NSCLC细胞系中均呈相应的高表达状态。2.qRT-PCR和,western blot实验结果表明：与癌旁组织相比,RMP在人非小细胞肺癌组织中的：mRNA和蛋白的表达水平均明显提高。同时发现RMP的表达与肿瘤组织的淋巴结和T-stage状态有关,与病人的年龄、性别和肿瘤类型无关。3.荧光显微镜、qRT-PCR和western blot实验表明：各组RMP质粒在A549细胞中瞬时转染顺利,mRNA和蛋白表达水平呈相应的提高。4.CCK-8试验表明：RMP明显促进A549细胞的增殖。5.CCK-8试验表明：在化疗药物剂量逐渐增加的作用下,RMP仍能够减缓A549细胞的死亡；流式细胞术检测表明：RMP能够减少化疗引起的细胞凋亡6.CCK-8试验表明：在辐射剂量逐渐增加的作用下,RMP仍能够减缓A549细胞的死亡；流式细胞术检测表明：RMP能减少放疗引起的细胞凋亡；western blot实验检测表明：在放疗后,RMP能够抑制A549细胞中凋亡相关基因蛋白的表达,促进抗凋亡相关基因蛋白的表达。7.流式细胞术检测表明：RMP能够减少由放疗引起的A549细胞周期G2期的阻滞,同时western blot实验表明：放疗后,RMP能够调节A549中细胞周期相关基因蛋白的表达。8.迁移和侵袭试验表明：RMP能够促进A549细胞的迁移和侵袭能力。9.裸鼠皮下移植瘤实验表明：RMP能够促进移植瘤的生长,同时免疫组化检测表明：RMP能够抑制凋亡相关基因蛋白的表达,促进抗凋亡相关基因蛋白的表达,从而促进肿瘤的生长。结论：1.RMP在人非小细胞肺癌中呈高表达的状态,结合临床病人信息发现它的表达与非小细胞肺癌病人的淋巴结和T-stage状态有关,说明RMP可能与NSCLC的生长和恶性程度有着密切的联系,是潜在的一种NSCLC相关促癌基因。2.RMP的过表达能够改变A549如细胞增殖、凋亡、周期、迁移和侵袭等各项生物学功能,促进移植瘤的生长,进一步表明RMP在NSCLC中扮演着癌基因的角色,为我们对肺癌的基因靶向治疗又提供一个强有力的目标。