研究背景与目的胃癌作为最普遍的恶性肿瘤之一,发病率近年来不断上升。然而,目前针对胃癌早期还没有比较有效的诊断,监测转移情况和判断预后的检测方法。免疫治疗也在胃癌的治疗中显示出光明的前景。但是,据相关报道,胃癌细胞可以通过多种机制来防止免疫系统产生有效的抗肿瘤免疫反应,从而逃避免疫监视。研究表明PD-L1能增加人抗原特异性T细胞克隆的凋亡并抑制CD4和CD8 T细胞的体外活化。并且PD-L1在包括胃癌在内的多个肿瘤中高表达。最新研究已经表明,PD-1或PD-L1的抗体可缓解的PD-L1对细胞毒性T细胞的抑制作用,从而促进与激活细胞毒性T细胞消灭肿瘤细胞的能力。并对于肿瘤中断PD1/PD-L1的信号通路对胃癌是一个有希望的治疗策略。脱嘌呤/脱嘧啶内切核酸酶1(APE1)不仅能修复DNA的损伤还可作为氧化还原活性蛋白,激活许多转录因子,APE1表达可增强胃癌的发生。SNP是对癌症易感性研究的重要的因子之一。之前的研究表明在PD-L1的几个外显子的基因多态性已被发现,并与其自身免疫疾病相关。针对胃癌的PD-L1相关的SNP还鲜有报道。第一部分首先检测了PD-L1和APE1,特别是PD-L1肿瘤免疫与107例胃癌患者之间的相关性。第二部分基于第一部分的临床资料,采用PCR-CTPP法对PD-L1基因单核苷酸多态性与胃癌易感性关系进行了研究;为以PD-L1为靶点的胃癌治疗策略研究提供相关理论支持。方法本课题分为两个部分。第一部分我们整理收集107例胃癌患者的组织标本采用免疫组化的方法对APE1和PD-L1的表达情况进行染色。观察这两种基因在胃癌组织中的表达情况,并分析他们的表达水平与临床病例特征、预后以及这两种基因的相关性。第二部分,我们收集整理了141例健康对照人群以及101例胃癌患者的,外周血血清标本,并从中提取了DNA,运用PCR-CTPP(引物聚合酶链反应)技术来分析了PD-L1的三个位点rs4143185,rs2890658和rs17718883(rs4143185位点由上海Invitrogen公司采用测序技术进行分析)单核苷酸多态性与胃癌易感性以及预后之间的关系。所有数据运用excel表格登记,收集;使用spss19.0软件对收集的数据进行统计分析。结果胃癌组织标本107例中,管状腺癌26例,粘液腺癌6例,印戒细胞癌22例,低分化癌例53例。pd-l1的阳性率为50.5%(54/107);ape1的阳性率为86.9%(93/107)。pd-l1与浸润深度(or=3.37;p=0.005),淋巴结转移(or=2.68;p=0.020),肿瘤分化程度(or=3.19;p=0.008)以及病理类型(χ2=8.676;p=0.013)有显著差异。同时,pd-l1在高分化癌,淋巴结转移和深层浸润肿瘤表达率更高。另外,kaplan–meier生存分析表明pd-l1的阳性表达与胃癌的较差的预后显著相关(p<0.05)。ape1在癌旁组织弱表达或不表达。大约86.9%(93/107)胃癌组织ape1阳性表达。ape1在胃癌中的表达在淋巴结转移(or=3.26;p=0.037),浸润深度(or=7.61;p=0.001)以及生存时间有显著差异(or=10.91;p=0.040)。ape1的阳性表达与胃癌的较差的预后显著相关(p=0.035)。49.5%(53/107)的胃癌组织共同表达这两个蛋白。spearmanrank相关分析显示ape1与pd-l1正相关(r=0.336,p<0.01),pd-l1andape1共同表达的胃癌患者生存预后差(p=0.003)。肿瘤部位,浸润深度,淋巴结转移,肿瘤分化程度以及病理类型与生存预后显著相关。贲门区的肿瘤中位生存时间(22±2.42months)较胃体部癌中位时间(45±3.86months,p=0.003)短。管状腺癌中位时间最长,为41个月,然而低分化癌的中位生存时间只有20±2.24月,(p=0.004)。浸润深度是胃癌的一个预后影响因素(rr=19.91;95%ci,:4.83–82.03;p=0.000)。在rs17718883中与cc纯合野生基因型相比,杂合突变cg基因型与gg纯合突变基因型以及cg(杂合突变)+gg(纯合突变)基因型的个体患胃癌的风险显著降低(校正or=0.238;95%ci:0.12~0.49;p<0.001);(校正or=0.057;95%ci:0.007~0.45;p<0.001);(校正or=0.196;95%ci:0.10~0.38;p<0.001)。卡方检验计算后,我们发现,rs17718883位点的等位基因g相对于等位基因c而言显著降低了胃癌的发病风险(or=0.210;95%ci:0.12~0.38;p<0.001)。rs17718883位点的cc基因型与cg基因型以及cg+gg基因型患者的中位生存时间分别为:22个月,56个月;差异有统计学意义(p=0.009);cg+gg的中位生存时间为56个月(ccvs.cg+ggp=0.014);但是ccvs.gg突变基因型未发现统计学差异,而且中位时间20个月低于cc突变的22个月,我们认为是由于gg突变只有1例,例数太少导致数据不均衡引起的。cox回归模型用来分析rs17718883位点我们发现,该位点的突变基因型都是os的有利因素,cg(hr:0.229,p=0.006)cg+gg(hr:0.266,p=0.007)差异有统计学意义,gg(hr:0.984,p=0.988)差异没有统计学意义。结论第一部分:1.在胃癌组织中PD-L1和APE1的阳性表达在浸润深度,淋巴结转移,病理类型,总生存时间中存在显著差异。PD-L1与APE1的表达都升高。2.胃癌患者组织高表达PD-L1和APE1较低表达者预后差。3.PD-L1与APE1的表达正性相关,对两者的联合检测对胃癌的诊断以及预后的评估有一定价值。第二部分:1.PD-L1(rs17718883)位点与胃癌发病风险显著相关,其等位基因G相能显著降低胃癌发病风险。2.rs17718883杂合突变CG基因型可能提示患者能获得较好的预后。纯合突变GG基因型也能降低人群患胃癌的风险,但是不能获得好的预后