论文部分内容阅读
流行病学统计结果显示,每年因癌症而死亡的病例中约有26%的人死于肺癌,而约15%的新增肺癌病例是小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer, SCLC)。小细胞肺癌是肺癌中恶性程度最高的肿瘤之一,临床治疗多以化疗为主,初治有效率高,但治疗过程中极易发生继发性耐药,而且治疗后易复发,患者的两年生存率极低。因此,人们迫切需要找到针对小细胞肺癌治疗的有效化疗药物。随着纳米技术的发展,越来越多的纳米药物被应用到肿瘤的靶向治疗中,如脂质体、树枝状分子、聚合物胶束、超顺磁氧化铁晶体和胶体金药物。已知纳米药物递送涉及到被动靶向和主动靶向。被动靶向是基于肿瘤周围脉管系统增强的渗透和滞留效应进行药物递送,无法从根本上克服常规化疗药物的非选择性杀伤作用。主动靶向则主要依赖配体与肿瘤细胞表面的受体结合,从而“引导”纳米粒子进入肿瘤细胞。现在已经开发的配体主要有叶酸、肽、蛋白、抗体、适配子和寡核苷酸。目前已有靶向纳米药物输送系统应用于多种肿瘤的治疗报道,有些药物甚至已经进入临床试验,但小细胞肺癌靶向递药系统的研究却鲜有报道。本研究旨在构建多西紫杉醇靶向纳米药物并评价其治疗效应。我们以SCLC细胞系H446为靶分子,采用噬菌体展示技术获得了与SCLC细胞系特异性结合的七肽。在采用乳化溶剂挥发法构建包载多西紫杉醇纳米粒子的基础上,将其与靶向肽相连接制备靶向纳米制剂。最后,通过体内外实验探究其抗肿瘤作用及其作用机制。主要研究结果如下：1. 以SCLC细胞系H446为靶分子,利用噬菌体展示技术筛选出能与之特异性结合的七肽(AP和AF)。并采用免疫组织化学技术评价其特异性。结果显示,筛选出的七肽具有与人小细胞肺癌病理组织特异性结合的能力。2.采用可生物降解的高分子材料聚乳酸(PLA)包载多西紫杉醇制备纳米药物,然后利用EDC缩合反应将其与靶向肽连接构建靶向纳米药物。理化性质分析结果显示,制备的纳米制剂平均粒径为195.4±3.9 nm,PDI平均值为0.19±0.03,平均Zeta电位值为-30.5±0.9 mV,而靶向纳米制剂的平均粒径为285.9±4.4 nm,PDI平均值为0.148±0.036,平均Zeta电位值为-30.1±0.6 mV. TEM电镜结果显示,靶向纳米粒子表面光滑,粒径均一。体外释放结果表明纳米药物能够有效释放。3.成功制备靶向纳米药物后进行体外抗肿瘤作用研究。细胞毒性实验结果显示,相同浓度的靶向纳米药物对小细胞肺癌细胞系H446的抑制作用显著强于常规药物多西紫杉醇,并具有一定的浓度依赖性。4. 细胞摄取结果表明,小细胞肺癌细胞系H446对靶向纳米制剂有较好的摄取能力,从而使靶向纳米制剂具有更强的杀伤作用。5.在体实验结果表明,与多西紫杉醇相比,多西紫杉醇靶向纳米制剂能够显著地抑制肿瘤生长,且动物对药物的耐受性良好。6.为探讨靶向纳米制剂的作用机制,我们对其体内分布情况进行了分析。实验结果显示,靶向纳米药物在肿瘤组织分布量是常规药物的4～7倍,而多西紫杉醇在动物肝脏及心脏的浓度均显著高于靶向纳米制剂。7. 各组动物的心、肝、脾、肺、肾、脑组织HE染色结果显示,各剂型药物均能抑制肺癌肝转移,但多西紫杉醇组和纳米药物组动物肝脏均有不同程度的肝细胞颗粒样、脂肪样变形,而靶向纳米药物组动物肝脏状态良好。综上所述,我们基于筛选得到的靶向肽构建了靶向纳米制剂,其在体内和体外实验均表现出明显优于常规药物的肿瘤细胞杀伤作用。靶向纳米药物在肿瘤组织具有较高的药物分布,此外还能有效地抑制小细胞肺癌的肝转移。