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大肠癌包括结肠癌和直肠癌,是临床上最常见的消化道恶性肿瘤之一。手术切除是治疗大肠癌最有效、最重要的手段;但是,大肠癌的起病隐匿,早期无特殊的临床表现,所以当大肠癌患者发现时多为进展期。生物免疫治疗作为肿瘤综合治疗的组成部分,既可以独立运用,又可与手术及放、化疗结合运用,具有疗效高、特异性强、不良反应小等优点,已成为肿瘤治疗研究领域的热点之一。Science评选出的2013年六大最值得关注的科学领域中包括肿瘤免疫治疗。其中,又以溶瘤病毒在肿瘤免疫治疗中的应用倍受瞩目。痘病毒有广泛的宿主范围;基因组大,能容纳大片段外源DNA,从而适用于多个外源基因的共表达;其免疫原性可增强宿主对肿瘤的免疫杀伤;能通过血液系统传递,靶向的运输到肿瘤组织。TK缺失的溶瘤痘病毒具有一定的选择性感染肿瘤组织的特点,使目的基因能较好地在肿瘤局部表达,因而痘病毒可作为基因治疗一种较为理想的载体,尤其作为溶瘤病毒介导肿瘤基因治疗将有着广阔的前景。静脉注射痘病毒可被免疫系统清除,因此多限于肿瘤内注射,限制了其在大肠癌的应用。将CIK作为载体介导痘病毒经静脉注射治疗大肠癌具临床应用前景。CCL5和SSTR2具强力抗肿瘤作用。CCL5可趋化多种白细胞如T、单核、NK和嗜酸/碱性粒细胞向肿瘤组织浸润,强化宿主抗肿瘤的免疫反应,其在肿瘤的发生、发展和转归中均发挥重要的作用,成为新的研究热点。生长抑素(Somatostatin,SS)是一种在人体中广泛分布的激素,通过靶细胞膜上的生长抑素受体(Somatostatinreceptor,SSTR)介导,负性调节多种生理功能。SSTR共有5种亚型,其中2型受体(Somatostatinreceptor2,SSTR2)被认为与肿瘤的关系最密切。生长抑素或生长抑素类似物(Somatostatin analogue,SSA)可通过SSTR2抑制肿瘤增生、诱导肿瘤细胞凋亡,并参与免疫系统调控,在肿瘤治疗中受到极大关注。本研究构建了重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+(rVV),拟以CIK为载体介导其经静脉注射治疗大肠癌,不仅有效避免rVV被免疫系统清除,将其准确输送至肿瘤,而且当CIK进入体内杀伤肿瘤细胞后,释放出的rVV将发挥二次杀伤肿瘤细胞作用。并且,CCL5高表达将定向诱导T、NK细胞靶向杀伤肿瘤;SSTR2高表达将精确定向并诱导奥曲肽到达肿瘤部位抑制肿瘤生长、诱导肿瘤细胞凋亡;发挥免疫/溶瘤双重协同抗肿瘤作用。研究通过构建痘病毒真核表达载体pSC65-CCL5-SSTR2-Luc,并经同源重组获得rVV,体外实验确定CIK作为载体荷载rVV的最佳实验方案。为后续体外实验评估CIK作为载体介导rVV治疗大肠癌的疗效及探讨其发挥溶瘤效应的作用机制提供有力支持,为进一步开展体内研究和临床研究打下了坚实的实验和理论基础。研究结果:1.成功构建了重组痘病毒真核表达载体pSC65-CCL5-SSTR2-Luc及其对照pSC65-Luc,经同源重组WR痘病毒,获得了重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+及其对照rVV-Luc+。2.确定感染复数50(MOI=50)和感染时间12h(T=12h)为CIK细胞作为载体荷载rVV的最佳实验方案。