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嗜酸乳杆菌是乳酸菌中重要成员之一,在粘附宿主肠道细胞、与致病菌竞争粘附位点、调节机体免疫功能上发挥着重要作用。作为粘附因子的S-层蛋白,受到越来越多学者的关注与研究。随着基因工程技术的飞速发展,研究者从S-层蛋白的蛋白分子层面深入研究到了基因分子层面。研究表明嗜酸乳杆菌还有另外一个S-层蛋白基因slpB,与slpA基因不同的地方slpB属于沉默基因,对于基因slpB研究报道很少,对于其是否具有粘附功能还需要进一步探索。本课题的主要研究方法与结果如下:1、以提取的嗜酸乳杆菌全基因组为模板成功克隆出slpB基因,条带大小接近1300 bp,与NCBI报道L.acidophilus NCFM基因库中slpB基因大小一致。构建了重组质粒pET-28a-slpB,经过双酶切验证,得到约1300 bp的目的片段和约5400 bp的载体片段,与预测值相符。测序结果与NCBI数据库比对结果正确。2、对构建的重组质粒pET-28a-slpB进行了表达,确定了目的蛋白上清表达高于沉淀表达。通过控制变量法得到了最佳的诱导表达条件:诱导温度37℃、IPTG终浓度1mM、诱导时间14h。通过目的蛋白上的His-tag标签进行纯化蛋白,经过Western-blot和SDS-PAGE检测分析得出His-slpB融合蛋白成功表达及纯化。后期对纯化的蛋白进行透析、浓缩,通过Bradford法检测得出蛋白浓度为0.6 mg/mL。3、将嗜酸乳杆菌正常表达的蛋白进行提取纯化,将从嗜酸乳杆菌表面提取的蛋白命名为SA,沉默基因slpB在大肠杆菌中表达的蛋白命名为SB。SA的β-折叠含量略高于SB,表明比SB结构稳定。通过二级结构表征两种蛋白两端氨基酸组成具有较高的一致性。两种蛋白均对胃蛋白酶具有良好的耐受能力,对胰蛋白酶耐受性较弱。更多的SB可以绑定到保加利亚乳杆菌和乳酸乳球菌的细胞壁上,在大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细胞绑定能力上,SB优于SA。在对Caco-2细胞粘附上SA优于SB。综上所述,本研究将沉默基因slpB进行了表达,对S-层蛋白结构与相关功能进行了测定分析,为S-层蛋白的开发与利用提供了一定的理论基础。