丙烯酰胺(acrylamide, ACR)是一种重要的化工原料,主要用来制造有“百业助剂”之称的聚丙烯酰胺(PAM)。PAM的需求量仍在逐年加大以致供不应求。这就决定了市场对合成PAM的原料——ACR的巨大需求。但是ACR是国际上确认的一种神经毒物。其产品主要是其水溶液,空气浓度大大降低,使人们忽略了它的皮肤吸收性,导致其神经毒性危害更具有隐蔽性。同时由于ACR中毒是法定职业病,无职业接触生物限值,近几十年,不断有ACR中毒的临床病例被报道。在此基础上,本室研究发现ACR染毒大鼠血清中NSE含量、calpain活性和氧化抗氧化水平均出现明显改变,因此为寻找合适的早期效应生物标志物,对ACR职业暴露人群血清NSE、calpain、GSH、GSH-Px、SOD、MDA等指标进行测定,以期能够在ACR作业工人中毒前发出预警,避免对工人健康造成不必要的伤害。目的一、探讨ACR暴露对血清NSE、calpain、氧化抗氧化水平的影响。二、寻找特异灵敏的ACR神经毒性早期生物效应标志物。三、优化气相色谱法测定ACR浓度的色谱条件、对硅胶采样管个体空气采样和皮肤采样进行方法学验证。方法一、优化色谱条件,并对优化后的色谱条件及采样工具进行方法学验证。二、问卷调查：对研究对象进行问卷调查。将研究对象中ACR作业工人和后勤管理人员分为ACR暴露组和对照组。三、现场样品采集与检测：1使用硅胶采样管进行个体空气采样；使用擦拭法进行皮肤采样；使用真空采血管进行血样采集。2使用气相色谱法检测空气中ACR浓度和皮肤污染量；使用电化学发光法测定血清中NSE含量；使用荧光法测定calpain活性；使用生化试剂盒测定血清GSH-Px和SOD活性的活性及GSH和MDA的含量。四、统计分析使用PASW Statistics18.0软件进行统计分析。针对ACR暴露对研究对象血清指标变化的影响进行单因素方差分析；将ACR外暴露量与暴露组血清各指标分别做相关分析；将不同ACR职业相关因素、个人基本情况对暴露组血清各指标变化的影响做单因素方差分析；对暴露组血清各指标变化进行多因素线性回归分析。结果一、气相色谱法色谱条件优化及方法学验证：汽化室240℃、柱温220℃、检测器250℃、分流比1：20、柱流量3.0ml/min、进样量2.0μ1。方法学验证：线性范围为0-2.0μg/ml,检出限为1.4×10-5μg/ml,保留时间1.633min；加标回收率、精密度、棉球平均洗脱率、硅胶采样管的解吸效率以及平均采样效率均符合国标要求。二、ACR暴露对研究对象血清NSE含量、calpain活性及氧化抗氧化变化的影响暴露组中NSE含量、GSH-Px活性、SOD活性、MDA含量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)；暴露组中calpain活性、GSH含量均低于对照组,前者差异具有统计学意义(P<0.05),后者差异不具有统计学意义(P>0.05)。三、暴露组血清NSE含量、calpain活性变化影响因素1.ACR外暴露剂量与NSE含量、calpain活性相关性：空气ACR浓度与NSE含量成正相关(r=0.635,P<0.05)；与calpain活性成负相关(r=-0.214,P<0.05)；皮肤ACR污染量与NSE含量成正相关(r=0.669,P<0.05)；与calpain成负相关(r=-0.231,P<0.05)。2.不同ACR职业相关因素对NSE含量、calpain活性变化的影响：NSE含量变化分别受到了空气ACR浓度、皮肤ACR污染量、工作时是否戴手套的影响(P<0.05); calpain活性变化分别受到了空气ACR浓度、皮肤ACR污染量、接毒年限的影响(P<0.05)。3.个人基本情况对NSE含量、calpain活性变化的影响：calpain活性变化分别受年龄、教育程度影响(P<0.05)。4.多因素对NSE含量、calpain活性变化影响：(1)NSE：皮肤ACR污染量,空气个体ACR含量、性别、吸烟、是否戴手套、是否戴口罩、对血清中NSE含量变化有显著影响,其中皮肤污染量对NSE含量变化影响相对较大(标准回归系数最大)。(2) calpain:年龄、皮肤ACR污染量、性别、抽烟对血清中calpain活性变化有显著影响,其中年龄分组对calpain活性变化影响相对较大。四、暴露组血清氧化抗氧化变化及影响因素1.ACR外暴露剂量与氧化抗氧化相关性：空气ACR浓度与GSH-Px活性、MDA含量成正相关(P<0.05),相关系数分别为0.199,0.271；皮肤ACR污染量与MDA含量成正相关(P<0.05),相关系数为0.329。2.不同ACR职业相关因素对氧化抗氧化变化影响：GSH-Px活性变化分别受空气ACR浓度、工作时是否戴手套的影响(P<0.05)；GSH含量变化受空气ACR浓度影响(P<0.05)；SOD活性受接毒年限影响(P<0.05)；MDA含量的变化分别受空气ACR浓度、皮肤ACR污染量、工作时是否戴手套影响(P<0.05)。3.个人基本情况对氧化抗氧化变化的影响：GSH-Px活性变化分别受年龄、是否吃油炸食品、是否饮用绿茶影响(P<0.05)；GSH含量变化受性别影响(P<0.05)；SOD活性变化分别受年龄、教育程度影响(P<0.05)。4.多因素对氧化抗氧化变化的影响：(1) GSH-Px:工作时是否戴手套和食用油炸食品对GSH-Px活性变化有显著影响,其中工作时是否戴手套对GSH-Px活性变化影响相对较大。(2)GSH：仅有空气ACR浓度对血清中GSH含量有显著影响。(3)SOD：仅有年龄分组对血清中SOD活性变化有显著影响。(4)MDA：皮肤污染量、工作中是否戴手套、是否戴口罩对血清中MDA含量变化有显著影响,其中皮肤污染量对血清中MDA含量变化影响相对较大。结论一、ACR暴露引起了血清NSE、MDA含量及GSH-Px活性升高。二、ACR职业暴露人群血清中NSE含量、MDA含量变化是由ACR通过皮肤吸收引起的,所以在职业暴露人群日常工作中需要注意做好皮肤ACR污染的防护。三、可以考虑以血清NSE为中心,血清GSH-Px活性和MDA含量为辅助,建立初步的ACR效应生物标志群,以期为职业暴露人群的ACR神经毒作用提出早期预警。四、本研究优化了毛细管柱测定作业场所大量ACR空气样品的色谱条件,该法具有测定快速,准确,检测限低等特点,不仅适合ACR日常监测的要求,更适合大批量现场样本的分析测定的需要。探索了ACR个体采样空气收集器应用,能更加准确的反应职业暴露工人的现场接触剂量。