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水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)是危害水稻的最重要病原线虫之一,分布于世界大多数的水稻种植区,在国内则广泛分布于大陆24省,目前在环渤海稻区发生较为普遍,其不仅危害水稻,还为害草莓、菊花等多种观赏植物和经济作物,造成重大经济损失。目前对于水稻干尖线虫的防治仍以使用杀线剂为主,对环境造成了污染,影响人类的生命健康。随着基因工程技术的快速发展,分子生物学方法成为研究植物线虫防治新方法的重要手段和途径。本研究对水稻干尖线虫致病力不同的N10群体(寄主为水稻)和S24群体(寄主为草莓)进行了miRNA高通量测序和分析,并克隆和筛选了水稻干尖线虫的理想内参基因,研究了这两个群体线虫的miRNA差异表达谱及4个高表达miRNA(miR-1、miR-34、miR-71和let-7-5p)在不同虫态的相对表达情况,对测序结果进行了生物信息学分析;并通过qPCR、原位杂交和miRNA mimics等方法初步研究了水稻干线虫部分miRN A的功能。主要研究成果如下:1、获得了水稻干尖线虫的miRNA测序结果和miRN A表达谱等信息;分别在N10和S24文库中得到了817和733个已知miRNA,其中差异miRNA为413个,254个miRN A在N10文库中上调表达,159个miRNA在S24文库中上调表达。2、qPCR验证了15个差异miRN A在N10和S24群体间的相对表达量的差异趋势与测序结果一致;miR-1、miR-34、miR-71和let-7-5p在两个群体内的不同虫态间存在差异,其中miR-34在卵中相对表达量显著低于其他虫态,并且差异倍数最大。3、miR-34的原位杂交结果表明其主要定位在雌雄虫生殖腺附近,且在雄虫交合刺附近清晰可见,呈点状。4、利用本课题组已有的水稻干尖线虫转录组数据,克隆了4个内参基因片段(actin、GAPDH、UBC和α-tubulin),并对在三种实验条件下的5个内参基因18S rRNA、actin、GAPDH、UBC和α-tubulin的稳定性进行了评估,得到了比较稳定的内参基因UBC,为水稻干尖线虫基因表达量的准确分析提供了合适的内参基因。5、对水稻干尖线虫的miRNA的靶基因进行GO和KEGG注释和富集分析,差异miRNA的靶基因主要富集在生长发育、细胞分化、催化转运等方面;miR-1、miR-34、miR-71和let-7-5p的miRNA的靶基因主要富集在信号转导通路、绑定连接和酶催化活性等功能方面。6、利用miRNA mimics浸泡线虫的方法检测了导入miRN A mimics对目的miRN A表达量的影响,浸泡24h后处理组的miR-34表达量升至最高,而对照组和清水组则差异不显著,证实了使用miRNA mimics浸泡水稻干尖线虫可以促进内源性miR-34表达量增加。本研究获得了水稻干尖线虫的miRNA文库和表达谱及其基因定量分析所需的合适内参基因,初步了解了部分miRNA可能具有的生物学功能,为进一步探究水稻干尖线虫miRNA在生长发育和致病过程中的作用和功能奠定了基础,对深入探索防治水稻干尖线虫新方法具有重要的意义。