活性氧(reactive oxygen species, ROS)是生物体一类有氧代谢的副产物,除作为有毒分子伤害细胞外,还作为一类重要的信号分子参与生物体的生长和发育。ROS的产生主要由呼吸爆发氧化酶基因(Respiratory Burst Oxidase Homologue,Rboh)所控制。研究表明,水稻OsRbohl基因在水稻种子萌发及抗逆能力上具有重要作用,但OsRbohl基因是否参与水稻花器官的发育尚不清楚。前期研究发现,在水稻OsRboh家族中仅OsRbohl在ROS水平升高的突变体mads3-4中的表达量明显上调,同时,RT-PCR分析发现OsRbohl基因在花药中的表达趋势与花药中ROS水平的变化趋势一致,说明该基因可能直接参与水稻花药中ROS的形成。但其具体的作用及分子机理并不清楚,值得进一步的研究。为了研究OsRbohl基因的特定时空表达模式,构建了原位杂交探针载体yBSK-OsRbohl-in situ。通过地高辛标记获得原位探针,试验结果发现OsRbohl基因主要在水稻花药发育第8,9和第10期的绒毡层和小孢子中表达,在第9期达到高峰,第10期开始下降,因绒毡层细胞在第8,9期时正处于程序性细胞死亡过程,因此我们推测水稻OsRbohl基因通过调控ROS的产生可能参与花药绒毡层细胞的程序性细胞死亡过程,进而影响水稻花药发育。为了进一步研究水稻OsRbohl基因的功能,根据在线软件WMD (Web MicroRNA Designer 3)推荐的序列,构建了OsRbohl基因的3个amiRNA载体pCaMV35S::OsRboh-amiRNA-1/2/3;同时,将OsRbohl中BLAST比对得到的一段非保守的区段作为干扰区段,构建了该基因的RNAi载体pUbi::OsRboh1-RNAi,通过电转法将重组载体转入农杆菌EHA105中,为后期进行水稻的遗传转化奠定了基础。另外,构建了OsRbohl基因的过表达载体OsRbohl电击转化将其导入农杆菌GV3101,喷雾法遗传转化拟南芥。对获得的78株再生植株经过潮霉素抗性筛选与PCR鉴定转化成功率为100.0%,下一步的工作将以高效液相色谱法或分光光度法等对转基因植株体内的ROS含量进行检测,为进一步研究OsRbohl基因在水稻ROS产生中的作用提供依据和线索。