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目的:以携带牙骨质蛋白1(cementum protein 1,CEMP1)基因的慢病毒LV-CEMP1-EGFP转染大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)并构建细胞膜片,探讨CEMP1基因修饰的BMSCs细胞膜片对骨质疏松状态下牙周组织再生的作用。方法:1.全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,使用流式细胞术检测其表面标志物,经成骨、成脂诱导后观察细胞的多向分化能力。2.使用维生素C连续诱导法构建BMSCs细胞膜片,通过组织学染色以及扫描电镜观察膜片的结构。使用免疫荧光染色检测膜片胞外基质Ι型胶原(collagen typeΙ,Col-Ι)、骨膜蛋白(periostin,PN)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达。3.使用携带CEMP1基因的慢病毒LV-CEMP1-EGFP转染BMSCs并构建细胞膜片,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR和Western Blot检测转染后BMSCs膜片中CEMP1基因和蛋白的表达。4.采用双侧卵巢切除术构建大鼠绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMO)动物模型,通过比较术后3个月大鼠体重以及股骨和子宫组织形态学鉴定模型构建是否成功。5.在PMO大鼠下颌构建牙周缺损模型,将CEMP1基因修饰的BMSCs膜片植入牙周组织缺损中,术后28 d取材制作组织切片,HE和Masson染色观察分析牙周组织再生情况,评价CEMP1基因修饰BMSCs细胞膜片对PMO大鼠牙周组织再生的作用。结果:1.成功分离培养大鼠BMSCs,经成骨诱导液培养21 d,茜素红染色可见矿化结节生成;成脂诱导液培养21 d,油红O染色可见空泡状脂滴形成。流式细胞术检测发现所培养的BMSCs高表达CD29、CD90和CD105,低表达CD31、CD45和CD34。2.成功构建BMSCs细胞膜片,膜片呈乳白色半透明薄膜状,细胞死活荧光染色示膜片由具有活力的细胞构成。3.HE和Masson染色可见BMSCs细胞膜片由多层细胞重叠排列,富含细胞外基质(extracellular matrix,ECM),免疫荧光结果示膜片ECM中高表达FN、PN以及Col-Ι。4.扫描电镜下可以观察到BMSCs膜片间存在大量ECM。5.成功构建转染LV-CEMP1-EGFP的BMSCs细胞膜片,流式细胞术检测其转染效率为85.2%,荧光倒置显微镜下可以观察到密集的绿色荧光表达。6.RT-PCR和Western Blot结果显示转染后的BMSCs细胞膜片中高表达CEMP1基因和蛋白。7.成功构建SD大鼠PMO模型,去势组大鼠体重较假手术组明显增加,子宫体积缩小,腺体萎缩,松质骨骨小梁稀疏,数目明显减少。8.CEMP1基因修饰的BMSCs膜片植入PMO大鼠牙周缺损28 d后,LV-CEMP1-EGFP组的新生牙骨质、牙槽骨以及牙周组织面积最大(P<0.05),LV-EGFP组和膜片组之间没有明显差异(P>0.05),但均较对照组面积大(P<0.05)。各组间新生牙周膜宽度没有显著差异(P>0.05)。结论:使用维生素C连续诱导法可成功构建BMSCs细胞膜片,膜片内细胞活力良好,富含ECM。CEMP1基因修饰的BMSCs膜片可促进PMO状态下的牙周组织再生。