目的:探讨乳腺癌细胞中ERα与p73α的相互调控。方法:感受态细胞购自与北京Trans Gen公司。用Flag-ER α lOng及Flag-p73αl0ng转化入DH5α感受态细胞,用LB培养基震荡培养过夜扩增DNA,用天根无内毒素质粒大提试剂盒提取DNA,并进行琼脂糖胶电泳来检测所提质粒纯度,用分光光度计检测质粒浓度。用Flag-ER α及Flag-p73α质粒转染乳腺癌MCF-7细胞。本研究的目的在于探测ER α与p73 α的相互作用,用DNA及空白载体按以下四组转染MCF-7细胞,四组DNA如下:6.5ugpcDNA3.0;2ugFlag-ERα+4.5ug pcDNA3.0;4.5ug Flag-p73α+2ug pcDNA3.0;2ug Flag-ERα+4.5ug Flag-p73α。MCF-7细胞购自上海中科院细胞库,用含10%胎牛血清的DMEM进行细胞培养及传代。当细胞密度达到大约60%时,用lipofection2000转染试剂按照产品说明书进行质粒转染。通过加用pcDNA3.0来确保每个盘中转染的总的DNA量相等。细胞转染质粒后培养18-24小时,去掉培养基,PBS洗三次,加入细胞裂解液用细胞刮子将细胞刮下,放在碎冰上,反复涡旋裂解细胞提取蛋白,并用Bradford法测595nm波长来做出蛋白标准曲线,进行蛋白定量。Western blot法检测MCF-7中ERα、p73α蛋白的表达。结果:1.质粒提取成功,DNA转染成功,蛋白表达佳。2.ERα及p73α相互抑制彼此的蛋白表达。结论:在ERα阳性的乳腺癌中,ERα抑制p73α的表达。P73 α蛋白量减少,其抑肿瘤作用减少,肿瘤发展加快。同时P73 α抑制ERα的表达。