【摘 要】
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目的:探讨树突状细胞(Dendritic cells,DCs)中结节性硬化症复合物1(Tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)在维持抗原特异性T细胞反应中的重要作用。方法:采用Cre-Loxp系统构建
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目的:探讨树突状细胞(Dendritic cells,DCs)中结节性硬化症复合物1(Tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)在维持抗原特异性T细胞反应中的重要作用。方法:采用Cre-Loxp系统构建DCs特异性敲除Tsc1小鼠(CD11cCreTsc1flox/flox,KO),分别采取琼脂糖凝胶电泳和Western blot实验方法定性分析基因Tsc1敲除情况,随后取KO及野生型(wild-type,WT)小鼠的脾脏和淋巴结,制成单细胞悬液,采用流式细胞检测CD11c+细胞比例及其数量;经免疫磁珠分选出CD11c+细胞,检测DCs增殖和数量比例;采用Annexin V/PI凋亡试剂盒检测DCs凋亡;分别采用体外细胞共培养系统和体内哮喘模型实验方法检测特异性敲除Tsc1的DCs对抗原特异性T细胞的应答能力,流式细胞术检测T细胞的细胞因子分泌水平。结果:Tsc1特异性敲除的小鼠,其TSC1蛋白表达完全消失;脾脏和淋巴结中DCs的比例及其数量明显降低。DCs增殖轻微增加,凋亡显著升高。体外实验采用DCs与OT-I/OT-II小鼠来源的CD8+T/CD4+T细胞共培养,实验结果发现T细胞增殖能力降低,体内实验采用OT-I/OT-II小鼠T细胞移植入WT/KO小鼠中,并使用OVA孵育,结果发现Tsc1敲除的DCs其诱导T细胞的增殖能力减弱。哮喘模型实验结果提示,Tsc1缺失的小鼠其T细胞适应性免疫应答受损,肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中嗜酸性粒细胞数目减少,血清中Ig G1的表达量明显降低,KO小鼠中Th2/Th17反应性降低。结论:Tsc1能够维持DCs数量,促进DCs诱导的抗原特异性T细胞反应。
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