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骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein15，BMP15)和生长分化因子9(growth differentiation factor9，GDF9)主要在卵母细胞内表达，调节卵泡发育和生殖功能。当BMP15和GDF9基因发生功能性突变时，会提高羊的排卵率和繁殖力。RNAi能特异性沉默特定的基因表达，已被广泛用于缺失特定基因的功能研究。慢病毒具有高度的感染和整合效应，能在哺乳动物各类细胞中稳定表达shRNA，并长期抑制靶基因的表达，被认为是表达shRNA的最佳基因转移载体。 在已有文献基础上，本研究拟通过RNAi技术抑制水牛BMP15和GDF9表达，减弱其功能，从而达到提高水牛繁殖力的目的。本研究针对BMP15和GDF9的mRNA分别设计三对siRNA，构建携带GFP的慢病毒载体(BMP15：LV-siRNA1，LV-siRNA2和LV-siRNA3；GDF9：LV-siRNAⅠ，LV-siRNAⅡ和LV-siRNAⅢ)，并且同时构建两个真核表达载体pcDNA3.1-BMP15和pcDNA3.1-GDF9。将BMP15和GDF9慢病毒载体与真核表达载体共转染CHO细胞，通过荧光倒置显微镜观察GFP表达量和采用qRT-PCR检测目的基因mRNA表达水平，最终筛选出抑制效果最佳的有效干扰载体(LV-siRNA3和LV-siRNAⅠ)，抑制效率分别为82.5％和98%(P<0.01)。显微注射法获得LV-siRNA3和LV-siRNAⅠ转基因小鼠各5只，PCR和Southern blot结果显示基因已成功整合。此外，将干扰效率好的shRNA序列(siRNA2，siRNA3，siRNAⅠ，siRNAⅡ)组合串联，分别选择不同启动子U6、H1、7SK以及U1，构建四个shRNA串联慢病毒载体pLV-multiple shRNA-GFP，并与BMP15和GDF9真核表达载体共转染CHO细胞，经检测能同时抑制细胞内BMP15和GDF9的表达，抑制效率与LV-siRNA3和LV-siRNAⅠ的抑制效率一致。该四联质粒经显微注射法获得PCR阳性转基因小鼠5只。这些转基因小鼠模型的建立为制备高繁殖力转基因水牛打下了前期基础。