RhoGDI2在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌生物学行为的影响

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目的:Rho GTP酶(RhoGTPases)作为控制诸多信号转导通路的重要细胞分子开关,在细胞骨架重建、细胞形态、细胞迁移、细胞周期和基因转录中发挥至关重要的作用,另外其在调节肿瘤增殖及凋亡中也发挥作用。鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho-specific guanine nucleotide dissociation inhibitor2,RhoGDI2)是RhoGTPases的调节因子之一,近年来其在肿瘤发生和进展中发挥的作用获得越来越多的关注,目前已有研究证实RhoGDI2与膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和胃癌等肿瘤发生发展具有相关性,尤其在调节肿瘤细胞凋亡、侵袭和转移、血管生成等方面作用尤为显著,但RhoGDI2在结直肠癌中的表达及相应作用机制却缺乏相关研究。本研究旨在探讨RhoGDI2在结直肠肿瘤临床组织标本中的表达及临床意义,进一步明确该基因对结直肠癌患者预后的影响,研究RhoGDI2在不同结直肠癌细胞系中的表达,构建稳定过表达RhoGDI2的结直肠癌细胞系,明确RhoGDI2过表达对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。方法:(1)通过免疫组化实验技术检测RhoGDI2在结直肠癌组织与相应癌旁组织及转移淋巴结中的表达,并分析RhoGDI2的表达与相应临床病理因素的关系,同时绘制生存曲线,分析该基因与结直肠癌患者总生存期及无病生存期之间的关系,进一步明确RhoGDI2与结直肠癌患者预后的相关性;(2)应用qRT-PCR及Western Blot实验技术检测RhoGDI2在结直肠癌细胞系HT29、SW620、HCT116中的表达情况,鉴别RhoGDI2高表达及低表达细胞系;(3)构建RhoGDI2过表达慢病毒载体,并用RhoGDI2过表达慢病毒载体转染HCT116细胞,应用qRT-PCR及Western Blot实验技术验证RhoGDI2已转入目的细胞,获得HCT116-RhoGDI2稳定细胞系,同时获得HCT116-control阴性对照细胞系,并利用CCK8、transwell小室实验研究RhoGDI2表达对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响。结果:(1)RhoGDI2表达在结直肠癌患者癌旁组织、肿瘤原发灶及转移淋巴结三者中表达阳性率分别为0%,33.3%,66.7%,表达量逐渐升高,且结果具有显著统计学差异(P<0.001);RhoGDI2表达与淋巴结转移、远处转移关系密切(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤数目、肿瘤分化程度、肿瘤分期、血管浸润、神经侵犯等无关(P>0.05),高表达RhoGDI2的患者总生存期及无病生存期短,低表达RhoGDI2的结直肠癌患者总生存期及无病生存期长;(2)RhoGDI2mRNA在HT29、SW620、HCT116三种结直肠癌细胞系中表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05),RhoGDI2蛋白在HT29、SW620、HCT116三种结直肠癌细胞系中表达量分别为1.393805±0.1307,0.087765±0.0313,0.04362±0.017,表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)成功构建稳定过表达RhoGDI2的HCT116-RhoGDI2细胞系,同时构建HCT116-control阴性对照细胞系,RhoGDI2mRNA在HCT116-RhoGDI2表达量最高,与HCT116-control及HCT116相比,差异具有统计学意义(P<0.01),HCT116-control及HCT116中RhoGDI2mRNA表达量无统计学差异(P>0.05)RhoGDI2蛋白在HCT116-RhoGDI2、HCT116-control及HCT116三种结直肠癌细胞系中表达量分别为1.5658±0.1787,0.0523±0.04396,0.0133±0.014436,RhoGDI2蛋白在HCT116-RhoGDI2表达量最高,与HCT116-control及HCT116相比,差异具有显著统计学意义(P<0.01),HCT116-control及HCT116中RhoGDI2蛋白表达量无统计学差异(P>0.05);(4)过表达RhoGDI2的HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力明显提高(P<0.01)。结论:RhoGDI2在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌淋巴结转移、远处转移明显相关,与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤数目、肿瘤分化程度、肿瘤分期、血管浸润、神经侵犯等无关;高表达RhoGDI2的患者总生存期及无病生存期短,低表达RhoGDI2的结直肠癌患者总生存期及无病生存期长;过表达RhoGDI2后结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显提高;RhoGDI2可作为结肠癌的早期诊断及预后的评判指标,是潜在的治疗靶点。
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