论文部分内容阅读
目的:通过观察凝血酶(Thrombin)对胎鼠大脑皮层神经元RhoA蛋白表达的影响:Thrombin抑制剂阿加曲班、RhoA抑制剂Exoenzyme C3对神经元RhoA蛋白表达以及细胞凋亡的影响,探讨RhoA蛋白在凝血酶介导神经元损伤中的作用机制。
方法:
(1)将体外培养的SD大鼠(孕18天)的胎鼠大脑皮层神经元,随机分为对照组和凝血酶组,并按照Thrombin不同浓度,又将凝血酶组分成1U/ml、10U/ml、30U/ml和100U/ml4个亚组,作用3h后,应用免疫荧光和Westernblot技术观察不同组别神经元RhoA蛋白的表达和分布情况。
(2)将胎鼠皮层神经元随机分成对照组和凝血酶(30U/ml)组,并按照不同作用时间,又将凝血酶(30U/ml)组随机分为0.5h、1h、3h、6h4个亚组,应用Westernblot技术观察神经元RhoA蛋白表达情况及峰值表达的时间。
(3)将胎鼠皮层神经元随机分成对照组和凝血酶(30U/ml、3h)组,然后按照同浓度、同时间(30U/ml、3h)的实验条件下,又将凝血酶(30U/ml、3h)组随机分为Thrombin、阿加曲班、Exoenzyme C33个亚组,其中阿加曲班、Exoenzyme C3亚组为分别加入阿加曲班和Exoenzyme C3预处理0.5h、12h后,再与Thrombin共孵育3h,然后采用免疫荧光和Westernblot技术观察不同组别神经元RhoA蛋白的表达情况,采用DAPI染色技术观察神经元凋亡情况。将以上结果进行统计学分析。
结果:
(1)与对照组相比,不同浓度Thrombin与神经元共孵育后,在浓度为30U/ml时,神经元RhoA蛋白表达显著增加;
(2)与对照组相比,Thrombin在作用3h时,神经元RhoA蛋白表达显著增加;
(3)与对照组相比,在Thrombin浓度为30U/ml、作用时间为3h时,神经元RhoA蛋白表达显著增加,且DAPI染色示神经元凋亡数量显著增加;与凝血酶(30U/ml、3h)组相比,阿加曲班组和Exoenzyme C3组神经元RhoA蛋白表达显著减少,且阿加曲班组和Exoenzyme C3组神经元凋亡数量亦明显减少,差异显著。
结论:
1.Thrombin通过激活RhoA蛋白的表达,介导神经元凋亡。
2.阿加曲班、Exoenzyme C3对Thrombin诱导的皮层神经元凋亡具有保护作用。