含丹参和1,6-二磷酸果糖的St.Thomas液持续低温微量灌注离体大鼠心脏的保护作用

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[目的]观察附加丹参注射液(SM)和1,6-二磷酸果糖(FDP)对St.Thomas液持续低温微量灌注离体大鼠心脏的保护作用。尝试从保存期间的冠脉流出液中寻找预测心脏保存质量的生物标记分子(biomarker)。[方法]SD大鼠24只,随机分为4组:对照组、SM组、FDP组、SM+FDP组。离体大鼠心脏用冰冷的St.Thomas液停搏后,用非循环Langendorff方式灌注30min,然后根据分组分别用St.Thomas液、St.Thomas液+SM、St.Thomas液+FDP、St.Thomas液+SM+FDP停搏心脏,并在4℃条件下持续灌注(20μl/min)保存6h后,再次灌注30 min,测定离体心脏保存前后心功能指标:左心室压力最大变化速率(±dp/dt max)、左心室发展压(LVDP)、心率(HR)和冠脉流量(CF),以及保存期间的冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性和心脏组织含水量。剩余的冠脉流出液中蛋白质经DOC-TCA法沉淀浓缩后,进行SDS-PAGE电泳银染色,寻找能够预测心脏保存质量的差异蛋白,测定差异蛋白分子量,并应用ImageJ软件处理蛋白质胶银染色图像,分析差异蛋白区带的灰度值与各项检测指标相关性。[结果]低温持续灌注保存后,在复灌20 min期间,SM组、FDP组、SM+FDP组的LVDP、-dp/dt max值均高于对照组(P<0.05),SM组、FDP组的+dp/dt max高于对照组(P<0.05),SM组、FDP组、SM+FDP组的+dp/dt max恢复率均高于对照组(P<0.05)。而HR和CF值,四组相互之间均没有明显差别(P>0.05)。SM组、FDP组、SM+FDP组的LDH酶活性均低于对照组(P<0.05),FDP组、SM+FDP组的CK酶活性低于对照组(P<0.05)。心脏含水量值,SM组、FDP组、SM+FDP组均低于对照组,但均无明显差别(P>0.05)。通过对SDS-PAGE银染色结果分析,寻找到具有差异的蛋白质区带:A(15.1kDa)、B(16.6kDa)、C(30.2kDa)和D(39.8kDa),其中区带A、B和C与CK酶活性呈正相关。[结论]应用低温持续微量灌注保存方法,在St.Thomas液中添加SM或FDP均可改善心脏保存效果,两者伍用效果与单用比较无明显差别。初步分析保存期间的冠脉流出液中差异蛋白质区带A、B和C与供心心肌受损有关,有待进一步研究。
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