【摘 要】
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非编码RNA在细胞中起到非常重要的调控作用。组成型衰变元件(CDE)是一段高度保守的含有茎环结构的RNA序列,存在于脊椎动物mRNA的3’末端非编码区,而这些mRNA大多数编码与细胞发育、基因转录、炎症和免疫调节相关的蛋白质,比如肿瘤坏死因子α,诱导型T细胞共刺激因子等。筛选发现CTLA4 RNA是一段长为15 nt的非编码RNA分子,其序列与已报道的CDE序列高度相似,而它的高级结构未知。有研究
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非编码RNA在细胞中起到非常重要的调控作用。组成型衰变元件(CDE)是一段高度保守的含有茎环结构的RNA序列,存在于脊椎动物mRNA的3’末端非编码区,而这些mRNA大多数编码与细胞发育、基因转录、炎症和免疫调节相关的蛋白质,比如肿瘤坏死因子α,诱导型T细胞共刺激因子等。筛选发现CTLA4 RNA是一段长为15 nt的非编码RNA分子,其序列与已报道的CDE序列高度相似,而它的高级结构未知。有研究报道Roquin和它的同源物Roquin-2通过结合细胞内mRNA的CDE序列,促进mRNA的降解,进而维持RNA在细胞内的稳态和预防自身免疫性疾病。人源Roquin-2蛋白是一类泛素连接酶(E3),它的N端主要包含ROQ和HEPN等结构域,其中ROQ结构域负责与RNA的结合。Roquin-2通过结合CDE而调控mRNA的作用机制是否存在普适的规律目前还不清楚。在本研究中,我们在体外分别纯化了CTLA4 RNA和人源Roquin-2蛋白的两个片段(171-325,87-404),通过EMSA实验确定了CTLA4 RNA和Roquin-2的相互作用。采用X射线晶体学的方法,解析了2.15?CTLA4 RNA和人源Roquin-2(171-325)的晶体结构。通过相互作用分析,我们发现Roquin-2蛋白的S235,K236,Q244和S261等氨基酸残基在结合CDE过程中起到至关重要的作用。通过序列比对,我们发现在CDE/Roquin-2复合物中RNA序列高度保守。这些工作都为进一步研究CDE/Roquin复合物的作用机制奠定了良好的结构基础。
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